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血清不稳定原因及应对解决方案
浏览次数:564发布日期:2024-05-13
  血清,指血液凝固后,在血浆中除去纤维蛋白分离 出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白已被除去的血浆。其主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞起到某些保护作用。血清在细胞培养中提供细胞生长所需的生长因子、激素、各种蛋白、促进贴壁和铺展的因子、细胞传代时蛋白酶抑制剂和其他多种不明营养物质,以胎牛血清(FBS)的使用最为普遍,其他血清类型还包括小牛血清、成牛血清、马血清、羊血清、鸡血清、兔血清等,其营养类型有很大差异,适用于不同类型细胞。
 
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  血清是细胞培养中用量zui大的天然培养基,含有丰富的细胞生长必须的营养成份,具有极为重要的功能:
 
  1、提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营养物。
 
  2、提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调变它们所结合的物质活力。
 
  3、有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。
 
  4、是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。
 
  5、起酸碱度缓冲液作用。
 
  6、提供蛋白酶抑制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。
 
  血清最大的劣势就是不稳定,不稳定原因如下:
 
  1、来源不稳定
 
  以胎牛血清为例,怀孕母牛在屠宰前腹部被剖开,取出胎牛,在低温无菌条件下,刺破胎牛的心脏以获取血清。就这一条,动物伦理组织就可以把你拦住唠唠。另外,牛血清必须来自有文件证明无牛海绵状脑病的牛群或国家,我国在对牛血清的质量《中国生物制品主要原辅料质控标准 2000》中提出比较严格的标准要求,包括蛋白质含量,细菌、真菌、支原体、牛病毒、大肠杆菌噬菌体、细菌内毒素,细胞增殖支持等检查。
 
  2、组分不稳定
 
  还有最让人闹心的,动物血清成分复杂,其组分及含量常和动物性别(公胎牛,母胎牛,如激素)、年龄、生理状态、营养条件不同而有差异,是不是觉得特像中药。还有,尽管血清大部分成分是已知的,但仍然存在不清楚的组分,所以导致标准化极其困难。所以,师兄师姐经常会告诉你说,不同生产厂家的血清差异很大,就是同一厂家生产的不同批次血清差异也很大。
 
  3、用法不稳定
 
  实验习惯的不同,都可能导致细胞实验结果的不稳定,比如,有人四度过夜融化,有人急性子,直接扔进水浴锅。新手拿到一瓶血清,第一个问题就是问自己,要不要灭活?度了一下答案,嚓,还是中药,说啥的都有。还有,别忘了,血清同时含有内毒素、血色素、补体、抗体等其他有害成分,影响细胞生长甚至导致细胞死亡,对某些实验来说,极为重要。
 
  如此的不稳定,该怎么在实验过程中尽可能的解决呢?
 
  1、土豪和有得选择的实验室,请选择无血清培养基。
 
  2、不要频繁更换血清牌子,不同厂家血清来源,生产工艺,包装运输等都有很大差异,尽量不要更换牌子。
 
  3、选定品牌后,对于经过测试过的好用的血清,同一个批次多囤积一些,计算本次实验的大概用量,然后在多加20%的储备,放在-20或-80度保存。
 
  4、细胞实验建议每个人用自己的培养基,PBS,胰酶等试剂以及用具,保持实验条件一致性,避免交叉污染,别给自己添堵,也别给别人添堵。
 
  5、如果实在要更换血清,先将细胞在新的血清里传两到三代,适应新的条件后,细胞状态稳定,再进行后续的实验。