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PCR基因扩增仪工作原理及种类结构
浏览次数:913发布日期:2023-10-16

 PCR技术的本质是核酸扩增技术,重复“变性(denature)→退火(anneal)→引物(primer)延伸(extension)"过程至25-40个循环,呈指数级扩大待测样本中的核酸拷贝数,达到体外扩增核酸序列的目的。

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 PCR的基本原理:

在PCR技术的发展过程中,热稳定DNA聚合酶的发现以及温度循环的自动化大大简化了PCR程序,使PCR的自动化成为可能,并在此基础上不断发展和改进。
PCR基因扩增仪的工作原理:
    PCR基因扩增仪工作关键是温度控制。
1.水浴锅控温:以不同温度的水浴锅串联成一个控温体系。
2.压缩机控温:由压缩机自动控温,金属导热,控温较第一代PCR基因扩增仪方便,但压缩机故障率高,边缘效应及温度overshooting现象严重。
3. 半导体控温:由半导体自动控温,金属导热,控温方便,体积小,相对稳定性好。
4. 离心式空气加热控温:由金属线圈加热,采用空气作为导热媒介,温度均一性好,各孔扩增效率高度一致,满足荧光定量PCR的高要求。
PCR扩增仪的分类与结构:
    PCR扩增仪的种类总体来说,可以分成两大类,即普通PCR扩增仪和实时荧光定量PCR扩增仪。
1、 普通PCR扩增仪
1).普通PCR扩增仪即通常所谓的定性PCR扩增仪。
2).梯度PCR仪是由普通PCR仪衍生出的带梯度PCR功能的基因扩增仪。
3).原位PCR仪是由普通PCR仪衍生出的带原位扩增功能的基因扩增仪。
2、 实时荧光定量PCR扩增仪
1.金属板式实时定量PCR仪,还可作为普通PCR仪使用,有的甚至带梯度功能,可容纳的样本量大,无需特殊耗材,但温度均一性欠佳,有边缘效应,标准曲线的反应条件难以做到与样品wan全一致。
2.离心式实时定量PCR仪的PCR扩增样品槽被设计为离心转子,温度均一性好,但可容纳样品量少,有的需用特殊毛细管作样品管,增加了使用成本,也不带梯度功能。
3.各孔独立控温的定量PCR仪的不同样品槽分别拥有独立的智能升降温模块,各孔独立控温,适合多指标快速检测,可实现任意梯度反应,但上样不如传统方法方便,而且需要du特的扁平反应管,使用成本较高。