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小鼠ELISA试剂盒实验原理
浏览次数:1020发布日期:2020-04-26

小鼠ELISA试剂盒实验原理:

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠血糖水平。用纯化的小鼠血糖抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入血糖,再与 HRP标记的血糖抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP  酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的血糖呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠血糖浓度。

1. 血清:室温血液自然凝固 10-20分钟,离心  20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2. 血浆:应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合 10-20  分钟后,离心20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3. 尿液:用无菌管收集,离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心 20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用  PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到 100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心   20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。

5. 组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持  2-8℃的温度。加入一定量的  PBS(PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

6.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.

7.不能检测含NaN3的样品,因     NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。