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掌握PCR鉴定试剂盒原理,操作流程更顺畅
浏览次数:116发布日期:2020-03-11
  原理
 
  本试剂盒是根据欧盟标准和国家标准而进行设计组装而成。
 
  本方法为荧光PCR检测方法,反应在同一管内连续进行,操作简单,并有效防止了污染,能对饲料中的猪源性成分进行快速检测,具有特异性高、敏感性强和操作简便的特点,探针报告基团为FAM,淬灭基团为None。
 
  特点:
 
  1.即开即用,用户只需要提供病毒RNA模板。
 
  2.两管式RT-PCR,一次RT反应产物可以作为多次PCR的模板。本试剂盒提供10次的RT反应试剂和50次的PCR试剂。
 
  3.引物经过优化,特异性高,引物是根据基因的保守区域设计,适用于所有强、中、弱新城疫毒株,产物长度为421 bp。
 
  4.PCR mix中含上样染料,PCR后可以直接上样电泳。
 
  操作流程:
 
  1.整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作,各区实验服、仪器、耗材应独立使用,不能混用;实验用吸头采用带滤芯吸头;样本处理区应配有生物安全柜,样本处理在生物安全柜中进行操作;三个区应该配有紫外线杀菌装置。
 
  2.为避免RNA降解,样本处理过程应在0-4℃条件下操作,且完成实验后立即上机检测;样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
 
  3.每次实验应该设置阴、阳性对照。
 
  4.试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀,并应瞬时离心。
 
  5.试剂盒内所配阴性和阳性对照在一次使用前应全部转移至标本准备区,并单独存放。
 
  6.为防止荧光干扰,应避免裸手直接接触PCR反应管,并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
 
  7.仪器扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置;不同批号试剂不能混用。
 
  8. ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正,淬灭基因选择None。
 
  9.实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。
 
  PCR鉴定试剂盒使用注意事项:
 
  1、基础程序;
 
  2、扩增温度和延伸温度;
 
  3、反应时间;
 
  4、循环次数;
 
  5、PCR 反应液的配制;
 
  6、PCR技术的基本原理;
 
  7、PCR的反应动力学;
 
  8、PCR扩增产物;
 
  9、PCR反应体系与反应条件。
 
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