植物直接PCR试剂盒采用*的裂解缓冲液快速裂解植物组织，释放的DNA无需纯化便可以作为模板，用高度耐抑制物的2×Direct PCR Mix扩增，扩增产物可直接上样电泳。适用于简单非多糖、多酚植物。操作简单，高通量筛选；一般扩增大小<2kb。

 

　　植物直接PCR试剂盒的操作步骤：

　　1、标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

　　2、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　3、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

　　4、配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

　　5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

　　6、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

　　7、温育：操作同3。

　　8、洗涤：操作同5。

　　9、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟

　　10、终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

　　11、测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

 

　　注意事项：

　　1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　2、浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

　　3、各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

　　4、如标本中待测物质含量过高，请先将样本稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请后乘以稀释倍数（×5×n）。

　　5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6、本试剂不同批号组分不得混用。显色剂B请避光保存。

　　7、严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准。

　　8、所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。