分享！植物直接PCR试剂盒的操作方法
浏览次数：146发布日期：2022-09-25
植物直接PCR试剂盒是一款可直接对不同类型植物叶片进行PCR扩增的试剂盒，适应性广、稳定性强。该试剂盒采用*的裂解缓冲液体系，可以快速的裂解多种植物样品并释放出基因组DNA，不需要除去蛋白、RNA或次生代谢产物等，即可将释放出的基因组DNA作为模板直接用于PCR反应。此外，样品使用量少，低至1 mm植物叶片即可进行实验。
本试剂盒中提供的2×Plant Master Mix具有很强的扩增兼容性，能直接以待测样品裂解液为模板，进行高效特异性扩增。该试剂为2倍浓缩PCR反应混合液，包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分，大大简化操作过程，降低污染几率。
该试剂盒可用于转基因植株鉴定、植物基因分型等。
植物直接PCR试剂盒的操作方法：
植物叶片：
1、研磨裂解法：
①研磨仪破碎：将直径5mm左右的叶片置于50μL Buffer P1中，用研磨仪加钢珠（钢珠直径3mm左右，共2个）破碎叶片（45Hz，1min），叶片破碎后溶液呈现绿色，瞬时离心，上清液请放在4℃备用，取1μL用于PCR扩增。
②枪头捣碎：推荐使用幼嫩叶片。将直径5mm左右的叶片置于50μL Buffer P1中，用枪头将叶片捣碎，捣碎后溶液呈现绿色，瞬时离心，上清液请放在4℃备用，取1μL用于PCR扩增。
2、加热裂解法：推荐使用幼嫩叶片。将直径5mm左右的叶片置于50μL Buffer P1中，95℃加热5-10min（确保裂解液*浸没叶片），较难裂解的叶片（老叶片）可适当延长时间（10-20min），加热裂解后溶液呈现绿色，震荡混匀，瞬时离心，上清液请放在4℃备用，取1μL用于PCR扩增。
3、直接法：推荐使用幼嫩叶片。使用打孔器或者刀，将直径1mm左右的叶片直接加入到PCR反应体系中；复杂样本或者是长片段的扩增，推荐使用直径<1mm的叶片。
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