分享8种常用的微生物菌种保存方法！
浏览次数：193发布日期：2022-07-26
微生物菌种分饲料发酵菌种和生物肥发酵菌种。该产品不但可以弥补常规饲料中容易缺乏的氨基酸，而且能使其它粗饲料原料营养成份迅速转化，达到增强消化吸收利用效果。下面介绍几种常见的保存方法！
几种常用的微生物菌种保存方法，如下：
1、常规保存法：
该法操作简单，只需普通冰箱保存，每个临床微生物实验室均可采用。但缺点是留存时间短，传代频繁，菌种易变异。
2、半固体穿刺保存法：
用穿刺接种法将细菌培养物接种于半固体培养基内，经37℃18-24h培养后，加一层无菌的液体石蜡，厚度约为1cm，置冰箱保存。肠道杆菌及葡萄球菌等，一般可保存3-6个月。当需传代移种时，将半固体菌种管倾斜使液体石蜡流至一边，再取菌移种于新的培养基。将沾有少量液体石蜡的接种环浸于95％酒精中片刻，再烧灼灭菌以免直接在酒精灯上烧灼时，液体石蜡四处溅散而引起污染。如保存副溶血性弧菌可加入NaCl制成3.5%高盐半固体，在室温下可保存1个月。
3、砂土管保存法：
适用于产芽孢的细菌，将过筛后的中性细砂烘干，装入小试管内约lcm高，塞以棉塞，灭菌烘干备用。用无菌生理盐水洗下培养基上的细菌培养物，制成菌悬液。然后吸此菌悬液约0.5ml注入砂土管内，以砂土全部浸湿为度。塞好棉塞，放入干燥器内抽干。然后放在装有氯化钙(吸水剂)的干燥瓶内，置冰箱保存备用。需用时可取一接种环砂土接种于适宜培养基上培养即可。
4、低温冷冻保存法：
实验室必须配备-20℃以下低温冰箱，冰箱温度越低，保存的时间越长。
5、滤纸片低温冷冻保存菌种方法：
将新华滤纸片剪成3mm×3mm，经高压蒸汽灭菌置无菌器皿中备用，0.5ml无菌带盖塑料离心管。将待保存菌种在血平板上分离纯化后，用无菌小镊子夹住滤纸片，在平板上刮取多量细菌，放在塑料离心管内，1只离心管中可放数十片带菌滤纸片，然后盖上盖子，用胶布将盖口封严，注明患者姓名，菌名及保存日期等以备查找。将塑料管放在-70℃冰箱内保存。使用时将菌种分别从塑料离心管中取出1片，放入增菌肉汤中，35℃孵育18～24ｈ，再将菌悬液移种于血平板上。本方法适于保存对营养要求不高的细菌，而不适于苛养菌的保存。
6、细菌鉴定卡保存菌种：
本法适用于使用VITEK全自动微生鉴定仪的实验室。方法是将鉴定卡标注后直接放置-20℃冰箱保存，复苏时将鉴定卡直接从-20℃移至35℃，待小孔液体*融化后，以无菌手续，用注射器抽吸出阳性生长孔内的液体，点种于合适平板，置35℃孵箱内24～48小时即可。该法生化卡内的细菌反复冻融5次，分离出的细菌效果相同。葡萄球菌属、肠杆菌属、念珠菌属存活时间不小于29个月；肠球菌属、黄杆菌属、不动杆菌属存活时间不小于21个月，链球菌属和假单胞菌属存活时间不小于10个月。
7、商品化菌种保存管：
每只保藏管中含20-25个小珠以及缓冲液，使用时将菌落挑入缓冲液中，混匀，将缓冲液吸去，置-70℃冰箱保存可达10年，-20℃冰箱可保存1-3年。复苏时，只需将小珠接入肉汤或平板上滚动即可。商品化菌种保存管操作简单，但价格偏高。笔者预计随着经济的不断发展和实验室条件的改善，使用的单位将会越来越多。
8、冷冻真空干燥保存法：
该法是目前保存菌种的最佳方法，具有如下几个突出的优点：
①适用范围广。除少数不产生孢子只产生菌丝体的丝状真菌不宜采用此方法保藏外，其他各大类微生物如细菌、放线菌、酵母菌、丝状真菌及病毒均可采用此方法保藏；
②保藏期长，成活率高。有人报道保藏在真空冷冻干燥安培管中的真菌成活期长达40多年，一般微生物至少可保存10余年；
③微生物在保藏期内可避免其它杂菌污染；
④便于携带运输，易实现商品化。其缺点为需要一定的设备、操作繁琐等。菌种管由传统的玻璃菌种管改为0.5ml带盖塑料离心管。
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