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ELISA试剂盒检测干扰实验与交叉实验应用
浏览次数:55发布日期:2025-06-24

ELISA试剂盒是一种用于检测生物样品中特定蛋白质或抗体的工具,通过酶联免疫吸附试验(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)实现。这种技术利用抗原抗体反应的特异性来识别和定量目标分子。

ELISA试剂盒检测的基本原理

ELISA基于抗原与抗体特异性结合的原理,通过酶标记的抗体或抗原与固相载体上的目标分子结合,然后通过酶催化底物显色反应,根据颜色变化来定量检测目标分子。

 

试剂盒原理图.png


要鉴别ELISA试剂盒是否检测目的抗原,可以采用干扰实验或交叉实验方法:

一、干扰实验:

ELISA试剂盒是否检测目的抗原可以通过干扰实验来验证。

具体步骤如下:

1. 准备干扰液:将针对试剂盒特异性的重组蛋白抗原与试剂盒中的检测抗体按照1:2的比例混合,配置成抗体-抗原混合液。

2. 替代检测抗体:将上述干扰液替换掉原试剂盒中的检测抗体,确保混合后的溶液能够充分孵育。

3. 操作步骤:将步骤2中的溶液在37°C下孵育15分钟,之后按照试剂盒说明书进行后续的实验操作,包括加酶复合物和底物。

结果分析:

 1)、如果标准曲线良好,说明加入的目的抗原与试剂盒抗体不匹配,试剂盒检测抗体针对的是非目的抗原,表明该试剂盒可能为伪劣或假造。

 2)、如果标准曲线无线性,说明试剂盒检测抗体已被目的抗原中和或干扰,影响了其实际检测作用,这表明该试剂盒检测抗体针对的是目的抗原。

通过这种干扰实验,可以有效辨别ELISA试剂盒是否正确地检测了目的抗原。此外,如果购买了同一公司生产的两个不同ELISA试剂盒(如AB),也可以通过交叉实验进行验证,确保它们检测的不是相同的指标。

 

二、交叉实验(适用于同一公司不同试剂盒):

步骤:

1. 取出购买的试剂盒A的包被板两条。

2. 一条包被板加试剂盒A的标准品做标准曲线。

3. 另一条包被板加试剂盒B的标准品做标准曲线。

4. 后续操作:按照试剂盒说明书进行,加检测抗体、酶复合物和底物,检测两条标准曲线。

结果分析:

如果两条标准曲线一致,说明两个ELISA试剂盒检测的是同一个指标而非AB,可能为伪劣假造ELISA

 

 


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