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关于多克隆抗体制备流程,以下有详细介绍
浏览次数:478发布日期:2021-10-24
  多克隆抗体一般通过免疫接种合适的哺乳类动物而产生,例如小鼠、兔子或者山羊。通常更倾向于采用大型哺乳类动物,因为可以采集更多的血清。首先将抗原注射到哺乳动物体内,(一般几星期后)诱导 B-淋巴细胞产生抗原特异性的免疫球蛋白 (IgG)。该哺乳动物血清经过纯化可得到多克隆 IgG。
 
  优势:
  1、由于多克隆抗体具有多个表位结合位点,可与靶蛋白的多个表位结合,所以,多克隆抗体有助于放大低表达水平的靶蛋白信号,但是,从结果的准确性来说,这个优势也是劣势,它会给定量实验造成不利影响,使结果变得不准确。
  2、由于能识别多个表位,多克隆抗体更适用于IP/ChIP实验,可得到更好的结果。
  3、制备时间短,所需技术和技能要求不高,成本比单克隆抗体低,稳定性强。
  4、双抗夹心法ELISA中捕获抗体选择多克隆抗体,可以快速捕获靶蛋白。
 
  多克隆抗体制备流程:
  1、抗原制备:
  a、蛋白抗原制备:拥有密码子优化平台及可溶性蛋白表达平台,可得到>90%纯度的可溶性抗原;
  b、多肽抗原制备:针对特定的蛋白结合位点序列设计合成多肽,并与KLH缀合用于免疫。
  2、免疫宿主:
  每只宿主进行4次免疫,包括初次免疫(加入*弗氏佐剂)和3次加强免疫(加入不*弗氏佐剂)。
  3、抗体纯化:
  提供两种抗体纯化方法,即抗原亲和纯化和Protein A/G纯化。