操作步骤：

1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2. 设置标准品孔、样本孔和空白孔，空白孔什么都不加；标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3. 待测样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；

4. 随后标准品孔和样本孔中（空白孔不加）加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6. 所有孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 所有孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

注意事项：

1.试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

2.实验中不用的试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

3.实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

4.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 

5.使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

6.使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

7.洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

8.底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

9.加入试剂的顺序应*，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

10.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。