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植物检测试剂盒样本处理方式
浏览次数:1031发布日期:2021-01-28

植物检测试剂盒样本处理:

取新鲜植物组织,清洗干净,擦干,剪碎,迅速称取, 按照20mg重量加入1ml Pro裂解液的比例加入Pro裂解液(建议使用1.5ml螺口离心管或锁盖离心管),沸水浴或干浴处理20分钟 (期间间歇混匀),10000rpm离心 2分钟,上清即为脯氨酸提取液,4℃保存备用。待测提取液如不能及时测定,应置于-20℃保存,1-2天内稳定。

植物检测试剂盒操作步骤:

一、粗酶液提取:

按照质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 1mL 提取液)加入提取液,室温匀浆后于 25℃,12000g 离心 10min,取上清待测。
 

二、测定步骤:

1、 分光光度计预热 30min 以上,调节波长 570nm,蒸馏水调零。

2、 将 1000μg/mL 氮标准液用提取液分别稀释为 200、100、50、25、12.5μg/mL。

3、 操作表:

混匀后盖紧瓶盖封口膜封口(防止水分散失),置于沸水浴中保温 10 min,冷却后反复颠倒 EP管数次,将测定管 8000rpm 离心 5min 后取上清,于 570nm 测定吸光值。显色后务必在 30min 内测完。计算△A=A 测定管-A 空白管,△A 标准=A 标准管-A 空白管。

三、植物氨态氮含量计算:

1、标准曲线的绘制
以各个氮标准液为横坐标,其对应的△A 标准为纵坐标,建立标准曲线,得到标准方程 y=kx+b,将△A 带入方程中,得到 x (µg/mL)

2、NH3-N 含量的计算

(1)按样本鲜重计算
NH3-N 含量(µg /g FW)=x×V 提取÷W= x÷W。

(2)按蛋白浓度计算

NH3-N 含量(µg/mg prot)=x×V 提取÷(Cpr×V 提取)= x÷Cpr。

W:样品质量,g;

Cpr:蛋白浓度,mg/mL;

V 提取:样品提取液总体积,1mL。