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植物直接PCR试剂盒技术原理与组成
浏览次数:890发布日期:2021-01-21

植物直接PCR试剂盒注意事项:

1.基础程序;

2.扩增温度和延伸温度;

3.反应时间;

4.循环次数;

5.PCR 反应液的配制;

6.PCR技术的基本原理;

7.PCR的反应动力学;

8.PCR扩增产物;

9.PCR反应体系与反应条件。

植物直接PCR试剂盒技术原理:

DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解链成单链,在DNA聚合酶与启动子的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子挎贝。
在聚合酶链式反应实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,并设计引物做启动子,加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。( DNA高温变性低温复性)
发现耐热DNA聚合同酶--Taq酶对于PCR的应用有里程碑的意义,该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶,使PCR技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。

植物直接PCR试剂盒组成及试剂配制:

1、酶标板:一块(96孔)

2、标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。

3、样品稀释液:1×20ml。

4、检测稀释液A:1×10ml。

5、检测稀释液B:1×10ml。