ELISA检测试剂盒实验原理：
 

　　本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人血管内皮生长因子(VEGF)水平。用纯化的人血管内皮生长因子(VEGF)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血管内皮生长因子(VEGF)，再与HRP标记的血管内皮细胞生长因子(VEGF)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的血管内皮生长因子(VEGF)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中人血管内皮生长因子(VEGF)浓度。
 

　　ELISA检测试剂盒技术原理：
 

　　1、抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。
 

　　2、结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。
 

　　3、酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。
 

　　4、受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。
 

　　5、此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。
 

　　6、加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。测定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平)，并且重复性好。以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术
 

　　ELISA检测试剂盒样本处理及要求：
 

　　1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
 

　　2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
 

　　3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
 

　　4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
 

　　5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
 

　　6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
 

　　7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
 

　　ELISA检测试剂盒注意事项：
 

　　1、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
 

　　2、浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
 

　　3、各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间*控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
 

　　4、请每次测定的同时做标准曲线，*做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔的OD值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。
 

　　5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
 

　　6、底物请避光保存。
 

　　7、严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
 

　　8、所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
 

　　9、本试剂不同批号组分不得混用。
 

　　10、 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。