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用LAMP鉴定试剂盒进行试验时,什么事项该注意?
浏览次数:46发布日期:2020-08-20
  LAMP鉴定试剂盒引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
 
  聚合酶链式反应(PCR)是体外酶促合成特异DNA段的一种方法,由高温变性、低温退火(复性)及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。 特异性强 PCR反应的特异性决定因素为: ①引物与模板DNA特异正确的结合...”
 
  LAMP鉴定试剂盒具有下列特点:
 
  1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。
 
  2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增巴戟天,与其他植物没有交叉反应。
 
  3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
 
  4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
 
  5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次,但只能用于科研。
 
  LAMP鉴定试剂盒用途:
 
  1. 方便,用户只需准备模板和引物既可以进行PCR 实验。
 
  2. 快捷,操作步骤已经限度地简化,能减少污染,降低实验误差。
 
  3. 本产品A 型含电泳染料,PCR 反应液可直接上样电泳,进一步简化了操作。
 
  4. 由于各成分的浓度和比例都经过精心优化,反应的灵敏度高,特异性强。能扩增各种常见的DNA 样品。
 
  5. 产物可直接用于T 载体克隆,不需要额外的加A 反应。
 
  使用及效果:将本产品15 μL 与用户自备的模板,引物和水共15 μL 混合后,直接进行PCR反(PCR 参数由用户自己确定),反应结束后直接取10 μL 电泳检查扩增结果。
 
  LAMP鉴定试剂盒使用注意事项:
 
  ①加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。
 
  ②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
 
  ③按照鸡血红蛋白(HB)ELISA检测试剂盒说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
 
  ④底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
 
  ⑤洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
 
  ⑥使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器 。
 
  ⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
 
  ⑧试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。
 
  ⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
 
  实验注意事项:
 
  1)RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
 
  2)客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
 
  3)客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
 
  4)样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
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