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以下这些就是PCR检测试剂盒的实验目的和原理
浏览次数:226发布日期:2020-07-17
  PCR检测试剂盒原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
 
  技术特点:
  1、PCR试剂盒准确可靠,临床双盲对照试验>1000例,结果与金标准测序法比对,结果*性大于99%。
  2、高灵敏:可检测低至10ng的人基因组DNA。
  3、快速:整个检测流程只需3小时。
  4、简便:试剂盒提供预混好的试剂,使体系配置操作简便。
  5、防污染
  6、产品仅用于科研高特异性:双重特异性组成,保证检测结果的特异性和准确性引物与DNA互补链结合必需完全配对,才能延伸。探针特异性与所检测基因的PCR产物配对,在延伸中产生荧光。
 
  PCR检测试剂盒的实验目的:
  1、掌握PCR法扩增目的基因片段的基本原理与方法;
  2、通过PCR验证目的基因片段是否插入质粒中;
  3、充分理解本学期三次分子实验的原理、联系与意义。
 
  实验原理:
  分子生物学实验技术基本原理:
  PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶链式反应,是指在DNA聚合酶催化下,以母链DNA为模板,以特定引物为延伸起点,通过变性、退火、延伸等步骤,体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。是一项DNA体外合成放大技术,能快速特异地在体外扩增一定长度的DNA片段。可用于基因分离克隆,序列分析,基因表达调控,基因多态性研究等许多方面。
  在高温(94℃)下,待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板;而后在低温(37~55℃)情况下,两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合,形成部分双链;在普通Taq酶的Zui适温度(72℃)下,以引物3’端为合成的起点,以d NTP为原料,沿模板以5’→3’方向延伸,合成DNA新链。这样,每一双链的DNA模板,经过一次解链、退火、延伸三个步骤的热循环后就成了两条双链DNA分子。如此反复进行,每一次循环所产生的DNA均能成为下一次循环的模板,每一次循环都使两条人工合成的引物间的DNA特异区拷贝数扩增一倍,PCR产物得以2n的形式迅速扩增,经过25~30个循环后,理论上可使基因扩增10 倍以上。
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