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实时荧光定量PCR在实验中需注意以下事项
浏览次数:599发布日期:2020-06-22
  实时荧光定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,Zui后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类,探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加,非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量(包括定量和相对定量)和定性分析。
 
  技术特点:
    1、准确可靠,临床双盲对照试验>1000例,结果与金标准测序法比对,结果一致性大于99%。
    2、高灵敏:可检测低至10ng的人基因组DNA。
    3、快速:整个检测流程只需3小时。
    4、简便:试剂盒提供预混好的试剂,产品仅用于科研实验使体系配置操作简便。
    5、防污染
    6、高特异性:双重特异性组成,保证检测结果的特异性和准确性引物与DNA互补链结合必需*配对,才能延伸。探针特异性与所检测基因的PCR产物配对,在延伸中产生荧光。
 
    实时荧光定量PCR实验注意事项:
    1、RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料,不同的样本有不同要求,实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况;
    2、客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号;
    3、客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
    4、样本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。