植物直接PCR试剂盒两种操作方法满足不同需求
浏览次数：624发布日期：2019-11-09
植物直接PCR试剂盒包含基因工程改造DNA聚合酶和高度优化的缓冲，特别适合从被抑制剂污染的材料中进行PCR扩增，亦可直接从植物材料中扩增目的基因片段，如叶片等。从植物来源DNA样品或直接从植物材料中扩增，面临很大的困难，因为样品中含有很多未知的抑制因子，可以一直DNA聚合酶的活性。
植物直接PCR试剂盒是一款可直接对不同类型植物叶片进行PCR扩增的试剂盒，适应性广、稳定性强。其采用*的裂解缓冲液体系，可以快速的裂解多种植物样品并释放出基因组DNA，不需要除去蛋白、RNA或次生代谢产物等，即可将释放出的基因组DNA作为模板直接用于PCR反应。此外，样品使用量少，低至1 mg植物叶片即可进行实验。
植物直接PCR试剂盒中提供的2×Plant Master Mix具有很强的扩增兼容性，能直接以待测样品裂解液为模板，进行特异性扩增。该试剂为2倍浓缩PCR反应混合液，包含了用于PCR扩增除模板和引物外的所有组分，大大简化操作过程，降低污染几率。
本试剂盒根据不同实验需求提供了两种操作方法。直接法仅需要将一小片植物组织加入PCR反应体系即可；裂解法则是将少量含有植物组织的裂解产物加入PCR反应体系。其中，裂解法适合目的片段较长，扩增难度较大，以及需要对同一样本进行多次PCR扩增的实验。
直接法：
1.在200μL离心管中加入相应的2×Plant Master Mix，再添加对应的引物，并用ddH2O使其稀释1×
2.剪取1-2 mg叶片碎块（直径2-3 mm）加入配置好的1×PCR反应体系。
3.根据优化好的PCR条件（退火温度等）进行PCR反应。
4.琼脂糖凝胶电泳检测结果。
裂解法：
1.取3-5 mg叶片（直径5-7 mm）组织，置于200μL或1.5 mL离心管中。
2.在离心管中加入50μL Buffer P1，确保裂解液能够*浸没叶片组织。
3.盖好离心管盖，95℃处理10 min。
4.加入50μL Buffer P2，用微量移液器吹打或者涡旋混匀。
5.所得裂解液可4℃保存（5天）或-20℃长期保存或直接用于PCR扩增。
注意事项：
1.本试剂盒只适合于多糖多酚含量低的植物叶片样本，如小麦、水稻、烟草、玉米、大豆、油菜等。不适合多糖多酚含量高的植物样本。
2.建议使用新鲜采取的叶片组织，若为长期冷冻组织，应尽量避免反复冻融，否则会导致模板的降解，影响PCR效率。叶片组织以幼嫩为宜，若为成熟的叶片，避免使用叶片主脉部位组织。
3.电泳检测时，切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否则，电泳时会在泳道中出现一大团拖尾亮带，影响实验结果。
4.建议扩增片段长度1 kb以内，以便扩增效率*。
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。
主要应用：
l)可从粗提或含有抑制剂的DNA模板中强力扩增目的基因；
2)直接从叶片，压碎种子和其他植物组织中PCR扩增目的基因；
3)快速检测转基因（GMO）的植物；
4)植物育种和转基因实验的快速简单筛选。
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