使用DOP-PCR试剂盒前期应该怎样处理样本？
浏览次数：644发布日期：2019-10-26
DOP-PCR（Degenerate Oligonucleotide Primer PCR，简并寡聚核苷酸引物PCR）是扩增全基因组的方法之一，它利用中间含有 6 个随机碱基的 22nt 引物，通过两轮 PCR（轮低温复性，第二轮高温复性）而将模板 DNA 扩增。
1、专门用于高度降解的 DNA，方便，含有除模板 DNA 和引物以外的所有成份，简化了准备工作。
2、优化的引物浓度，使自连序列和非模板相关序列的合成。
3、使用高保真酶，降低突变率。
4、长度在 300-1700bp 之间，平均 500bp 左右。
5、模板基因 DNA 用量一般为 10-100pg。
6、所得 PCR 产物可用于 STR 多重扩增、比较基因组杂交、单染色体文库构建、基因组图谱研究等。
7、运输及保存 低温运输、-20℃保存, 保存期限为 12 个月。不要反复冻融。
8、自备试剂 DNA 模板、引物、超纯水。
9、快速简便：全程约50分钟，可测100例左右样本。
10、取样量微：本法取样本量100ul。
11、稳定性好：试剂盒2～8℃存放6个月有效。
12、再现性好：变异系数CV=1.7%。
13、回收试验： X =103.3%。
14、受外界影响因素小：干扰因素少，重复性强。
15、测试面广：可测动物组织、红细胞以及各种培养细胞、各种水产等，效果均佳。
DOP-PCR试剂盒所需仪器及自备试剂：
1、分光光度计/酶标仪/半自动生化分析仪（比色测定波长为636nm）
2、恒温水浴箱或气浴箱 （孵育温度为37℃）
3、台式离心机
4、漩涡混匀器
5、微量移液器
样本收集与前处理：
红细胞：需按照试剂盒中说明书上红细胞的测定方法进行提取后测定。
动物组织样本：可用盐水按重量体积比制备成组织匀浆液，离心取上清测定。
培养细胞：常用PBS作为匀浆介质破碎后离心取上清测定。
具体的样本前处理：参考我们随货发送的《实验方法学》以及试剂盒中详细说明书。
操作流程：
1、酶促反应：按说明操作加入样本100l和混合试剂，37℃准确反应10分钟
2、加R7，3500转/分，离心10分钟，取上清
3、定磷：取上清液加入定磷剂，室温静置2分钟加终止剂
4、636nm波长，1cm光径，比色
DOP-PCR扩完整基因组的效率不如利用 phi 29 DNA 聚合酶的 MDA，但在扩增高度降解的痕量 DNA 方面具有巨大优势，在法医鉴定领域具有重要应用。
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