以细胞融合为基础的鼠杂交瘤技术的发展，使得人们能够大量获取高亲和性和强特异性的鼠单克隆抗体(McAb)，McAb在理论和实践上的应用成为解决生物学和医学等许多重大问题的重要手段。但是鼠源性单抗应用于人类的临床应用结果反映出了单克隆抗体药物存在的一些问题：

 

鼠源性单抗容易容易产生人抗鼠抗体(HAMA) ,在体内作为异源蛋白被清除掉，从而削弱其治疗的有效性。

鼠源性单抗在人体内生物活性降低，其Fc段不能有效激活人体FcRn及补体系统的效应功能。

鼠源性单抗在人体内的半衰期短，因而降低了其疗效。

因此，人们一直致力于人源性抗体的研究，鼠抗体人源化就是通过基因改造，使其和人体内的抗体分子具有极其相似的轮廓，从而逃避人免疫系统的识别，避免诱导HAMA（人抗鼠抗体）反应。进行抗体的人源化有两个基本原则：保持或提高抗体的亲和力和特异性；大大降低或基本消除抗体的免疫原性。人源化有多种方案，都必须遵循这两个原则，尤其不能丧失抗体特异结合的能力。

 

抗体的结构与功能

1、抗原：进入动物体内对肌体的免疫系统产生刺激作用的外源物质。

包括：蛋白质、多糖、核酸、病毒、细菌、各种细胞等。

特点：外源性、结构性（分子表面具有稳定的环状结构基团作为识别位点）、特异性（抗原与抗体的反应）。

2抗体

动物免疫系统分泌的中和或消除抗原物质的影响的糖蛋白，存在于血清中，本质是免疫球蛋白（Immuniglobulin,Ig）。

动物脾脏有上百万个B淋巴 细胞，一个细胞就是一个克隆，它针对抗原上的一个抗原决定族产生的抗体是单克隆抗体。

一种抗原通常具有多个不同的抗原决定族，因此能刺激多个B淋巴细胞产生相应的单克隆抗体，因此血清中的抗体是针对不同抗原决定族的单克隆抗体混合物，称为多克隆抗体。

 

单克隆抗体的制备

动物免疫与亲本细胞的选择

细胞融合：淋巴细胞杂交瘤的制备

杂交瘤细胞的筛选：有限稀释法等

单克隆抗体的制备和冻存

单克隆抗体的纯化

亲本细胞的选择

骨髓瘤细胞：一般不分泌抗体，能在体外无限繁殖和连续继代培养，且为HPRT－（次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶）或TK－（胸腺嘧啶核苷激酶） 。多用BALB/C 小鼠的骨髓瘤细胞。[小鼠骨髓瘤细胞能在体外无限增殖传代并不分泌抗体。肿瘤细胞DNA生物合成有两条途径：一条由糖、氨基酸合成核苷酸，进而合成DNA，这是主要途径。这条途径可被叶酸的拮抗物—氨基喋呤(A)所阻断(但如果培养基中含核苷酸“前体“次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷，即便有A存在，细胞通过另一途径(称替代途径或应急途径)也可合成核苷酸。但后一途径需次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转化酶(HGPRT)和胸腺嘧啶核苷激酶 (TK)存在)。]

淋巴细胞：经过免疫处理的淋巴细胞，多用大鼠或小鼠。

免疫方法：对细胞或微生物抗原可直接注射如小鼠体内，可溶性蛋白抗原可与等量的福氏*佐剂混合乳化后，注入到动物体内。