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大豆PCR检测试剂盒检测反应步骤与注意事项详述
浏览次数:731发布日期:2019-05-24
 大豆是常见的农作物,很多时候需要通过检测大豆专一性内源基因的存在来判断某些食品中是否含有大豆成分或添加剂。大豆PCR检测试剂盒即是基于基因荧光探针PCR法的大豆Lectin基因的快速检测试剂盒,适用于样品中大豆源性成分的快速检测。
 
大豆PCR检测试剂盒产品特点
 
1.灵敏度高,分析灵敏度可以达到50拷贝/uL,远高于常规方法,也比常规的PCR检测高100倍。
2.特异性高,根据大豆Lectin基因的保守区设计引物,不会误检。
3.一管封闭式,避免了PCR产物对后续PCR的污染。
4.线性范围广,在10-107拷贝/uL的靶分子浓度范围内均呈线性。
5.简单快捷,只需要2小时即可得到实验结果。
 
大豆PCR检测试剂盒反应步骤
 
类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:
 
1、模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;
 
2、模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
 
3、大豆RR/SS PCR检测试剂盒引物的延伸:DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的"半保留复制链",而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟,每一循环经过变性、退火和延伸,DNA含量既增加一倍。 2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。(Plateau)。到达平台期所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。
 
大豆PCR检测试剂盒操作注意事项:
 
1:组份A中含有染料,染料的加入不影响PCR反应,反应产物可直接电泳,节省时间。
 
2:本试剂盒检测范围涵盖支原体所有种属,真核细胞和革兰氏阴性菌不会造成干扰,与支原体亲缘关系较近的革兰氏阳性菌在反应中的灵敏度较支原体低1000-10000倍。
 
3:本试剂盒适用于检测支原体感染,客户如需区分感染的种属,可将PCR产物切胶然后测序,进行序列比对即可知种属类型。
 
4:有时可直接用细胞培养上清进行PCR反应。培养上清中常含有高浓度的PCR抑制剂,可能导致假阴性结果,故不建议使用此法。有些PCR抑制剂用离心可以除去,若离心不能去除,则推荐抽提基因组DNA进行PCR。而某些PCR抑制剂,如黑色素,通过抽提基因组DNA也不能去除,此时可以通过加入高浓度(如2%)的BSA(牛血清白蛋白)中和其抑制活性。
 
5:假阴性结果判断方法:在测试反应管中同时加入测试样品和阳性对照样品,观察对照条带是否出现。在阳性对照管出现对照条带的情况下,如果测试反应管的对照条带和检测条带都没有出现,则可判断为PCR反应受到了抑制,即假阴性结果。阳性对照管如果没有出现对照条带,请检查PCR条件是否恰当,或者与我们联系。
 
6:每个测试样品建议做两个反应:一个与阳性对照样品共同反应,排除假阴性结果,另一个单独反应,可避免因加入阳性对照样品所致的灵敏度降低。如果测试样品中支原体含量很高,可能会抑制阳性对照条带的出现。