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测定意义：

土壤汞污染能够通过食物链传递和富集，对植物、动物和人类健康产生威胁。矿山开发、工业加工、农业生产和生活垃圾常常造成土壤汞污染，因此评价和防止土壤重金属污染常常需要测定土壤汞含量。

测定原理：

土壤经消化后，汞以Hg2+离子形式存在；Hg2+能与二硫腙生成橙色络合物，溶于三氯甲后，在490nm测定吸光度，即可计算S-Hg含量。

自备仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、恒温水浴锅、可调式移液枪、100目筛（可更小）、浓硫酸、浓盐酸、浓硝酸、三氯甲和蒸馏水。

试剂组成和配制：

标准品：液体×1支，4nmol/mL Hg标准液，4℃保存。

试剂一：自备。在该试剂瓶中加入52mL蒸馏水，36 mL浓盐酸，12mL浓硝酸，混匀，4℃避光保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加18.4 mL蒸馏水充分溶解。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加3 mL蒸馏水充分溶解。

试剂四：粉剂×1支，4℃保存。临用前加1.5 mL蒸馏水充分溶解。

试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加5.2 mL蒸馏水充分溶解。

试剂六：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加20 mL三氯甲充分溶解。

S-Hg检测：

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min，体积波长到490 nm，三氯甲调零。

2. 样品管：风干的土壤，过100目筛后精确称取0.1 g左右，装入EP管；加入1 mL试剂一，充分混匀后沸水浴消化60 min。取出冷却后室温8000g离心10min，吸取20 μL上清液加入新的EP管；再先后加入180 μL蒸馏水和20 μL浓硫酸，混匀；最后加入180 μL试剂二，混匀后40℃水浴24h，期间震荡数次。

2. 标准管：取EP管，加入20 μL标准液，180 μL蒸馏水和20 μL浓硫酸，混匀；最后加入180 μL试剂二，混匀后40℃水浴24h，期间震荡数次。

3. 加入20 μL试剂三，震荡直到无色；开盖静置30min，期间摇荡数次，以排出气体。

4. 加入10 μL试剂四，充分混匀后静置5min；加入50μL试剂五，盖紧后震荡至少1min，静置10min以分层。

5. 小心吸取20 μL下层溶液，加入200 μL试剂六，震荡使无色，静置10 min以分层。

6. 小心吸取140 μL下层溶液，加入微量玻璃比色皿/96孔板，于490nm处比色，记录各管吸光值。记为A样品管和A标准管。

注意：标准管只需测定一次。

S-Hg浓度计算公式：

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

Hg（nmol Hg/g 干重）=[C标×(A测定管÷A标准管)]×V总÷V样÷W

                     =200×(A测定管÷A标准管)÷W

C标：标准液浓度，4 nmol/mL Hg；V总：上清液总体积，1 mL；W：土样质量，g；V样：加入上清液体积，20 μL=0.02 mL。

b.使用96孔板测定的计算公式如下

Hg（nmol Hg/g干重）=[C标×(A测定管÷A标准管)]×V总÷V样÷W

                     =200×(A测定管÷A标准管)÷W

C标：标准液浓度，4 nmol/mL Hg；V总：上清液总体积，1 mL；W：土样质量，g；V样：加入上清液体积，20 μL=0.02 mL。

注意事项：

1、试剂一有刺激性气味，易挥发，实验过程中应注意佩戴口罩和手套，使用完立即盖好盖子，以免试剂不够；

2、测定过程中需加入浓硫酸，加浓硫酸时需注意，避免溅到皮肤或眼睛上；

3、静置分层后，用1mL移液枪，排除空气后，轻轻插入下层溶液中，缓慢吸取下层溶液。

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