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肠出血性大肠杆菌:血清型PCR检测试剂盒

  • 更新时间:  2019-04-30
  • 产品型号:  
  • 简单描述
  • 肠出血性大肠杆菌:血清型PCR检测试剂盒说明书是即用型PCR试剂盒的改良产品, 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR 增强剂、上样染料等所有PCR 所需要的成分,用户只需加入模板和引物即可进行PCR 反应,具有广泛的用途。
详细介绍

特点:
高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增;
高灵敏度:检测灵敏度可达10~100;
操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测;
高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。

产品名称

肠出血性大肠杆菌:血清型PCR检测试剂盒说明书

英文名称

Enterohemorrhagic E. coli(EHEC)O104:H4PCR

分类

PCR检测试剂盒

样品 DNA 的制备:
1.用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼 容。。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒 DNAout。 本试剂盒免费赠送 15 次 DNA 病毒裂解液试用装(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀释阳性对照(以 10E2-10E7 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的长为 86bp 的 DNA 片段作为阳性对照。
2.标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
3.用带芯枪头分别加入 45 μL 模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4.在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡 1 分钟,得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。5.换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6.换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7.换枪头,在 4 号管中加 5 μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照到 4 号管中,得1×10E4 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。8.重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

使用及效果:
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。

ELISAKitforHumanPlacentalprotein13-like500G 0.78-50 ng/mL1-溴-3-硝基苯 1-Bromo-3-nitrobenzene >98.0%(GC)

MBD4抗體,兔多抗,抗原親和純化 958-60-1 100mg 0.999WB   IP   2-丁-2,4-DNPH

人肺腺癌细胞,HCC-78细胞 20mg HPLC≥98%4-[2-(3,5-dihydroxyphenyl)ethenyl]benzene-1,3-diol白藜芦 29700-22-91 x 10^6 cells/T25培养瓶白藜芦

MICA抗體(FITC),鼠單抗5mgFCM   固 ALDOSTERONE(SH)

伯氏疏螺旋体(BB)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)476-32-4 20mgChelidonine HPLC≥98% 15.6-1000 pg/mL白屈菜碱

人组织蛋白酶L(Cath-L)ELISA试剂盒88206-46-6 20mg Notopterol 31.2-2000 pg/mL羌活

IL12A&IL12B抗體,兔多抗1787013C24H39NO9Mesaconine≥98%ELISA   新乌头原碱

ELISAKitforHumanHighmobilitygroupproteinHMG-I/HMG-Y204935-85-35mg 3,7,4'-Trihydroxy-5-methoxy-8-prenylflavanone 0.156-10 ng/mL(2R,3R)-3,7,4'-三羟基-5-氧基-8-异基二氢黄

大鼠胸大动脉平滑肌细胞,A7R5细胞11 x 10^6 cells/T25培养瓶Fluka标准品广州代理

锰盐营养琼脂/Manganese(II)NutrientAgar7529-22-8用于嗜热需氧芽孢杆菌的检验7529-22-8 4-基吗啉-N-物-助催化剂

ELISAKitforHumanSphingosine1-phosphatereceptor35mg 0.156-10 ng/mL华蟾素 CINOBUFOTALIN(RG)

大鼠脉络膜成纤维细胞 20mg HPLC≥98%Sennoside D用于含量测定5 x 10^5 cells/T25培养瓶番泻苷D;蕃泻苷D

人癌胚抗原细胞粘附分子(CEACAM1)ELISA试剂盒481-46-9 20mgGinkgetin HPLC≥98% 15.6-1000 pg/mL银杏素;白果双黄,银杏双黄,银杏黄素

EpCAM/TROP-1/TACSTD1抗體,兔多抗,抗原親和純化2586-96-1HPLC≥98%A056220mg/支ELISA   WB   莲心碱

ELISAKitforHumanEpidermalgrowthfactorreceptor104-55-2 20mg Cinnamaldehyde 78-5000 pg/mL肉桂

CellAdhesionMolecule2/CADM2抗體,兔多抗,抗原親和純化40957-83-3C16H12O5Glycitein≥98%WB   黄豆黄素

肠出血性大肠杆菌:血清型PCR检测试剂盒说明书岩藻糖//墨角澡糖/L-去氧水解糖  1g 5g 平板计数琼脂(PCA)颗粒

6-姜;姜  HPLC≥98% 6-Shogaol 人胚肾细胞,AD-293细胞 用于含量测定

鸡豆黄素A 20mg  5,7-Dihydrox -4'-methoxyisoflavone ELISAKitforHumanDesmoglein-3

告达庭 20mg  Caudatin 人巨噬细胞来源的趋化因子(MDC/CCL22)ELISA试剂盒

β-榄香 C15H24 β-Elemene RBKS抗體,兔多抗 ≥98%

管花苷B C32H40O16 Tubuloside B TGF-beta1/TGFB1抗體,兔多抗,抗原親和純化 HPLC≥98%

1-十六烷/鲸蜡 CETYL ALCOHOL(1-HEXADECANOL)(SG)  10mg 人白三B4受体1(LTB4R)ELISA试剂盒

二氢欧山芹素;二氢山芹 20mg columbianetin 鹅特定基因序列(Goose)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法) HPLC≥98%

 


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