肠粘附性大肠杆菌PCR检测试剂盒说明书
特点:
高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增;
高灵敏度:检测灵敏度可达10~100;
操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测;
高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
产品名称 | 肠粘附性大肠杆菌PCR检测试剂盒说明书 |
英文名称 | Enteroadhesive E.Coli(EAEC)PCR |
分类 | PCR检测试剂盒 |
样品 DNA 的制备:
1.用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼 容。。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒 DNAout。 本试剂盒免费赠送 15 次 DNA 病毒裂解液试用装(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀释阳性对照(以 10E2-10E7 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的长为 86bp 的 DNA 片段作为阳性对照。
2.标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
3.用带芯枪头分别加入 45 μL 模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4.在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡 1 分钟,得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。5.换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6.换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7.换枪头,在 4 号管中加 5 μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照到 4 号管中,得1×10E4 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。8.重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
使用及效果:
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
人发动蛋白1(DNM1)ELISA试剂盒6812-81-3 20mg Roburic acid 0.156-10 ng/mL栎樱酸
PTH1R/PTHR1抗體,兔多抗479-98-1C15H22O9Aucubin≥98%ELISA 桃叶珊瑚苷
兔冠状动脉平滑肌细胞 20mg HPLC≥98%Blinin用于含量测定5 x 10^5 cells/T25培养瓶苦蒿素
人状旁腺激素(PTH)ELISA试剂盒1mg 23.44-1500 pg/mLSt. John's Wort (Hypericum perforatum) Aerial Extract #4 BXL(REQUEST QUOTE)
甘露发酵管6192-52-5BR6192-52-5 用于氨基酸自动分析
ELISAKitforHumanTumornecrosisfactorreceptorsuperfamilymember10B100mg 0.31-20.0 ng/mL姜黄素 CURCUMIN(AS)
SerpinA6抗體,兔多抗24939-16-0HPLC≥95%A008820mg/支ELISA 双去氧基姜黄素
人C9orf140蛋白(ProteinC9orf140)ELISA试剂盒480-10-4 20mgAstragalin HPLC≥98% 0.78-50 ng/mL紫云英苷;黄芪苷、莰非-3-O-葡萄糖苷、山柰-3-葡萄糖苷、百蕊草素Ⅱ
ACY1/Aminoacylase-1抗體,兔單抗479-98-1HPLC≥98%A069420mg/支IHC-P 桃叶珊瑚苷;杜仲苷
ELISAKitforCholesterol960383-96-4 20mgJatrorrhizine hydrochloride HPLC≥98% 7.8-500 pg/mL盐酸药根碱;药根碱
人肌球蛋白轻链激酶(MYLK)ELISA试剂盒250ML 0.156-10 ng/mL4-苄基哌啶 4-Benzylpiperidine >99.0%(GC)
R2A琼脂培养基304-93526 250gWako 304-93526 和光纯药 现货
ELISAKitforHumanPairedimmunoglobulin-liketype2receptorbeta5mg 0.156-10 ng/mLDIDEMETHYLSIMMONDSIN, 4,5-(P)
Endoglin/CD105抗體(PerCP),鼠單抗25mgFCM 香柠檬亭 BERGAMOTTIN(P)
人脂肪细胞膜相关蛋白(APMAP)ELISA试剂盒104012-37-5 20mgTussilagone HPLC≥98% 0.156-10 ng/mL款冬;款冬素,款冬花素
CD3e/CD3epsilon抗體(FITC),鼠單抗27409-30-9HPLC≥98%A015520mg/支FCM 胡黄连苷I
肠粘附性大肠杆菌PCR检测试剂盒说明书Polybutylene Terephthalate聚合物标准品 PBT52K 肉浸液肉汤培养基/肉浸液肉汤/MeatInfusionBroth
臀果木标准品试剂盒 PYGEUM STANDARDS KIT(P) 8 x 10mg CD31/PECAM1抗體(FITC),鼠單抗
乙酰哈巴苷 C17H26O11 8-O-Acetylharpagide CD164抗體(APC),鼠單抗 ≥98%
山-3-O-芸香糖苷;莰菲-3-O-芸香糖苷 HPLC≥98% Kaempferol-3-O-rutinoside 小鼠骨髓源性肥大细胞 用于含量测定
覆盆子;拉斯 HPLC≥98% 4-(4-hydroxyphenyl)-2-butanone 人高转移肺癌细胞,95-D细胞 覆盆子 5471-51-2
啶酸铬 CHROMIUM(III)PICOLINATE(SH) 1g 人嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)ELISA试剂盒
2-硝基苯 100mg 0.98 Ago4抗體,兔多抗,抗原親和純化
英国Decon90清洗剂 迪康90清洗液 英国Decon 90 M-H琼脂平板/M-HAgarPlate