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H辅酶ⅠNAD测试剂盒微量法

  • 更新时间:  2022-04-16
  • 产品型号:  
  • 简单描述
  • H辅酶ⅠNAD测试剂盒微量法
详细介绍

【友情提示】:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。避免给您带来不必要的损失,请仔细阅读购买说明!

产品名称检测方法产品规格产品货号
H辅酶ⅠNAD测试剂盒微量法微量法100管/48样FS-01S63210

商品介绍

测定意义

辅酶ⅠNAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循环(TCA)的主要氢受体,生成的NADH经呼吸电子链(ETC)传递把电子交给氧,在合成ATP的同时,形成大量的ROS,同时NADH再生为NAD+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和TCA循环的强弱。较高的NAD(H)及NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高,处于过氧化状态。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循环。另外,NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。

测定原理

分别用酸性和碱性提取液提取样品中NAD+和NADH,NADH通过PMS的递氢作用,还原氧化型噻唑蓝(MTT)为甲瓒,在570nm下检测吸光值;而NAD+可被乙醇脱氢酶还原为NADH,进一步采用MTT还原法检测。

需自备的仪器和用品

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

自备仪器和用品:

酶标仪、离心机、移液器、96孔板、研钵、冰和蒸馏水

测定步骤:

1、 酶标仪预热30min以上,调节波长至450nm。

2、 试剂三的稀释:将试剂三用蒸馏水稀释50倍,用多少配多少。(试剂三和蒸馏水1:49稀释。

3、 工作液配制:在试剂一加入100μl试剂二,充分混匀。配好的试剂4℃避光可保存一周。(若一次性测定样本较少,可按照实际用量将试剂一和试剂二按照20ml:0.1ml的比例混匀配制)

4、 将一瓶试剂四用5ml蒸馏水溶解(溶解后一周内用完)。

5、 样本测定(在96孔板中依次加入下列试剂)充分混匀,室温静置30min后,450nm处测定各管吸光值A。QQ截图20220307153604.png


注意事项:


待测样品-70℃可保存1个月。需注意反复冻融会导致SOD部分失活。

一个试剂盒如果不能在3次内使用完毕,其中的WST-8需要在使用时适当分装,以避免反复冻融导致的检测效果下降。

标准品稀释时所用的稀释液应尽量与样品一致。样品用试剂盒提供的SOD样品制备液制备时,标准品也宜使用SOD样品制备液进行稀释;当样品为血液等无需处理的样品时,宜使用试剂盒提供的SOD检测缓冲液稀释标准品。

抗氧化物会对本试剂盒的检测产生干扰,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都会使测定出来的吸光度显著升高。此时尽管样品没有颜色,如果设置了使用说明中的空白对照3,就可以消除样品中的抗氧化物的干扰。

操作步骤:

实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.        加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

2.        弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

3.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

4.        每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。

7.       依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.       用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后立即进行检测。

IL17A & IL17F     Protein    Human    重组人 IL17A & IL17F Heterodimer 蛋白 (His 标签)

IL23     Protein    Human    重组人 IL23A & 小鼠 IL12B Heterodimer 蛋白 (His 标签)

ITIH3     Protein    Human    重组人 ITIH3 蛋白 (Fc 标签)

GH1     Protein    Human    重组人 GH1 / Growth hormone 1 蛋白

ICAM5     Protein    Human    重组人 ICAM 5 / Intercellular adhesion molecule 5 蛋白 (ECD, His 标签)

GLT8D2     Protein    Human    重组人 GLT8D2 蛋白 (His 标签)

LDLRAD3     Protein    Human    重组人 LDLRAD3 蛋白 (ECD, Fc 标签)

ANTXR2     Protein    Human    重组人 ANTXR2 / CMG2 蛋白 (Fc 标签)

NLGN4X     Protein    Human    重组人 NLGN4X 蛋白 (His 标签)

GYPC     Protein    Human    重组人 GYPC / Glycophorin-C 蛋白 (His 标签)

OBP2B     Protein    Human    重组人 OBP2B / Odorant-binding protein 2b 蛋白 (His 标签)

VMO1     Protein    Human    重组人 VMO1 蛋白 (Fc 标签)

SSR1     Protein    Human    重组人 TRAP-alpha / SSR1 蛋白 (Fc 标签)

STC1     Protein    Human    重组人 STC-1 / Stanniocalcin-1 蛋白 (His 标签)

LY6D     Protein    Human    重组人 LY-6D / LY6D 蛋白 (Fc 标签)

GFER     Protein    Human    重组人 GFER / ALR 蛋白 (His 标签)

GALNT7     Protein    Human    重组人 GALNT7 蛋白 (His 标签)

小鼠气管上皮细胞*培养基    100mL    磷酸化活化复制因子2抗体

小鼠气管平滑肌细胞*培养基    100mL    磷酸化失调症蛋白1抗体

小鼠肺成纤维细胞*培养基    100mL    锚蛋白重复结构域蛋白17抗体

小鼠支气管上皮细胞*培养基    100mL    胞质乙醛脱氢酶1抗体

小鼠支气管成纤维细胞*培养基    100mL    ADP核糖基化样因子ARL3抗体

小鼠肺大静脉平滑肌细胞*培养基    100mL    花生四烯酸15脂氧合酶1抗体

小鼠肺大动脉平滑肌细胞*培养基    100mL    乳腺癌增强蛋白2抗体

小鼠肺大动脉内皮细胞*培养基    100mL    α1微球蛋白抗体

小鼠肺动脉成纤维细胞*培养基    100mL    α晶状体球蛋白B/αB-crystallin抗体

小鼠肺大静脉内皮细胞*培养基    100mL    腺苷A2b受体/神经生长因子1受体抗体

小鼠气管和支气管上皮细胞*培养基    100mL    AMPK的相关蛋白激酶5抗体

小鼠胰岛细胞*培养基    100mL    致瘤磷蛋白32相关蛋白1抗体

小鼠胰腺星状细胞*培养基    100mL    腺苷脱氨酶抗体

小鼠胰腺导管上皮细胞*培养基    100mL    含锚蛋白重复序列-细胞因子信号抑制物盒蛋白家族4抗体

小鼠颌下腺上皮细胞*培养基    100mL    ATRNL1蛋白抗体

小鼠腮腺细胞*培养基    100mL    AFP4a蛋白抗体

H辅酶ⅠNAD测试剂盒微量法小鼠乳腺上皮细胞*培养基    100mL    铁蛋白Fe65样蛋白1抗体

小鼠胰腺上皮细胞*培养基    100mL    铁蛋白Fe65样蛋白2抗体

小鼠甲状腺上皮细胞*培养基    100mL    β淀粉样蛋白前体蛋白结合蛋白2抗体

小鼠淋巴管内皮细胞*培养基    100mL    早老素稳定因子样蛋白/γ分泌酶组件蛋白APH1抗体



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