H辅酶ⅠNAD测试剂盒微量法
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产品名称 | 检测方法 | 产品规格 | 产品货号 |
H辅酶ⅠNAD测试剂盒微量法 | 微量法 | 100管/48样 | FS-01S63210 |
商品介绍
测定意义 辅酶ⅠNAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循环(TCA)的主要氢受体,生成的NADH经呼吸电子链(ETC)传递把电子交给氧,在合成ATP的同时,形成大量的ROS,同时NADH再生为NAD+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和TCA循环的强弱。较高的NAD(H)及NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高,处于过氧化状态。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循环。另外,NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。 测定原理 分别用酸性和碱性提取液提取样品中NAD+和NADH,NADH通过PMS的递氢作用,还原氧化型噻唑蓝(MTT)为甲瓒,在570nm下检测吸光值;而NAD+可被乙醇脱氢酶还原为NADH,进一步采用MTT还原法检测。 需自备的仪器和用品 可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。 |
自备仪器和用品:
酶标仪、离心机、移液器、96孔板、研钵、冰和蒸馏水
测定步骤:
1、 酶标仪预热30min以上,调节波长至450nm。
2、 试剂三的稀释:将试剂三用蒸馏水稀释50倍,用多少配多少。(试剂三和蒸馏水1:49稀释。
3、 工作液配制:在试剂一加入100μl试剂二,充分混匀。配好的试剂4℃避光可保存一周。(若一次性测定样本较少,可按照实际用量将试剂一和试剂二按照20ml:0.1ml的比例混匀配制)
4、 将一瓶试剂四用5ml蒸馏水溶解(溶解后一周内用完)。
5、 样本测定(在96孔板中依次加入下列试剂)充分混匀,室温静置30min后,450nm处测定各管吸光值A。
注意事项:
待测样品-70℃可保存1个月。需注意反复冻融会导致SOD部分失活。
一个试剂盒如果不能在3次内使用完毕,其中的WST-8需要在使用时适当分装,以避免反复冻融导致的检测效果下降。
标准品稀释时所用的稀释液应尽量与样品一致。样品用试剂盒提供的SOD样品制备液制备时,标准品也宜使用SOD样品制备液进行稀释;当样品为血液等无需处理的样品时,宜使用试剂盒提供的SOD检测缓冲液稀释标准品。
抗氧化物会对本试剂盒的检测产生干扰,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都会使测定出来的吸光度显著升高。此时尽管样品没有颜色,如果设置了使用说明中的空白对照3,就可以消除样品中的抗氧化物的干扰。
操作步骤:
实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。
1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。
3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
4. 每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。
5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。
7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后立即进行检测。
IL17A & IL17F Protein Human 重组人 IL17A & IL17F Heterodimer 蛋白 (His 标签)
IL23 Protein Human 重组人 IL23A & 小鼠 IL12B Heterodimer 蛋白 (His 标签)
ITIH3 Protein Human 重组人 ITIH3 蛋白 (Fc 标签)
GH1 Protein Human 重组人 GH1 / Growth hormone 1 蛋白
ICAM5 Protein Human 重组人 ICAM 5 / Intercellular adhesion molecule 5 蛋白 (ECD, His 标签)
GLT8D2 Protein Human 重组人 GLT8D2 蛋白 (His 标签)
LDLRAD3 Protein Human 重组人 LDLRAD3 蛋白 (ECD, Fc 标签)
ANTXR2 Protein Human 重组人 ANTXR2 / CMG2 蛋白 (Fc 标签)
NLGN4X Protein Human 重组人 NLGN4X 蛋白 (His 标签)
GYPC Protein Human 重组人 GYPC / Glycophorin-C 蛋白 (His 标签)
OBP2B Protein Human 重组人 OBP2B / Odorant-binding protein 2b 蛋白 (His 标签)
VMO1 Protein Human 重组人 VMO1 蛋白 (Fc 标签)
SSR1 Protein Human 重组人 TRAP-alpha / SSR1 蛋白 (Fc 标签)
STC1 Protein Human 重组人 STC-1 / Stanniocalcin-1 蛋白 (His 标签)
LY6D Protein Human 重组人 LY-6D / LY6D 蛋白 (Fc 标签)
GFER Protein Human 重组人 GFER / ALR 蛋白 (His 标签)
GALNT7 Protein Human 重组人 GALNT7 蛋白 (His 标签)
小鼠气管上皮细胞*培养基 100mL 磷酸化活化复制因子2抗体
小鼠气管平滑肌细胞*培养基 100mL 磷酸化失调症蛋白1抗体
小鼠肺成纤维细胞*培养基 100mL 锚蛋白重复结构域蛋白17抗体
小鼠支气管上皮细胞*培养基 100mL 胞质乙醛脱氢酶1抗体
小鼠支气管成纤维细胞*培养基 100mL ADP核糖基化样因子ARL3抗体
小鼠肺大静脉平滑肌细胞*培养基 100mL 花生四烯酸15脂氧合酶1抗体
小鼠肺大动脉平滑肌细胞*培养基 100mL 乳腺癌增强蛋白2抗体
小鼠肺大动脉内皮细胞*培养基 100mL α1微球蛋白抗体
小鼠肺动脉成纤维细胞*培养基 100mL α晶状体球蛋白B/αB-crystallin抗体
小鼠肺大静脉内皮细胞*培养基 100mL 腺苷A2b受体/神经生长因子1受体抗体
小鼠气管和支气管上皮细胞*培养基 100mL AMPK的相关蛋白激酶5抗体
小鼠胰岛细胞*培养基 100mL 致瘤磷蛋白32相关蛋白1抗体
小鼠胰腺星状细胞*培养基 100mL 腺苷脱氨酶抗体
小鼠胰腺导管上皮细胞*培养基 100mL 含锚蛋白重复序列-细胞因子信号抑制物盒蛋白家族4抗体
小鼠颌下腺上皮细胞*培养基 100mL ATRNL1蛋白抗体
小鼠腮腺细胞*培养基 100mL AFP4a蛋白抗体
H辅酶ⅠNAD测试剂盒微量法小鼠乳腺上皮细胞*培养基 100mL 铁蛋白Fe65样蛋白1抗体
小鼠胰腺上皮细胞*培养基 100mL 铁蛋白Fe65样蛋白2抗体
小鼠甲状腺上皮细胞*培养基 100mL β淀粉样蛋白前体蛋白结合蛋白2抗体
小鼠淋巴管内皮细胞*培养基 100mL 早老素稳定因子样蛋白/γ分泌酶组件蛋白APH1抗体