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H辅酶ⅠNAD测试剂盒微量法

  • 更新时间:  2022-04-16
  • 产品型号:  
  • 简单描述
  • H辅酶ⅠNAD测试剂盒微量法
详细介绍

【友情提示】:本产品仅供科研研究使用,不得用于人体临床直接检测。避免给您带来不必要的损失,请仔细阅读购买说明!

产品名称检测方法产品规格产品货号
H辅酶ⅠNAD测试剂盒微量法微量法100管/48样FS-01S63210

商品介绍

测定意义

辅酶ⅠNAD(H)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循环(TCA)的主要氢受体,生成的NADH经呼吸电子链(ETC)传递把电子交给氧,在合成ATP的同时,形成大量的ROS,同时NADH再生为NAD+。糖、脂、蛋白质三大代谢物质分解中的氧化反应绝大部分通过这一体系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于评价糖酵解和TCA循环的强弱。较高的NAD(H)及NADH/NAD+比值说明细胞呼吸耗氧量较高,处于过氧化状态。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循环。另外,NAD+降解产物对细胞信号传导、代谢和基因表达等具有重要的调控作用。

测定原理

分别用酸性和碱性提取液提取样品中NAD+和NADH,NADH通过PMS的递氢作用,还原氧化型噻唑蓝(MTT)为甲瓒,在570nm下检测吸光值;而NAD+可被乙醇脱氢酶还原为NADH,进一步采用MTT还原法检测。

需自备的仪器和用品

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

自备仪器和用品:

酶标仪、离心机、移液器、96孔板、研钵、冰和蒸馏水

测定步骤:

1、 酶标仪预热30min以上,调节波长至450nm。

2、 试剂三的稀释:将试剂三用蒸馏水稀释50倍,用多少配多少。(试剂三和蒸馏水1:49稀释。

3、 工作液配制:在试剂一加入100μl试剂二,充分混匀。配好的试剂4℃避光可保存一周。(若一次性测定样本较少,可按照实际用量将试剂一和试剂二按照20ml:0.1ml的比例混匀配制)

4、 将一瓶试剂四用5ml蒸馏水溶解(溶解后一周内用完)。

5、 样本测定(在96孔板中依次加入下列试剂)充分混匀,室温静置30min后,450nm处测定各管吸光值A。QQ截图20220307153604.png


注意事项:


待测样品-70℃可保存1个月。需注意反复冻融会导致SOD部分失活。

一个试剂盒如果不能在3次内使用完毕,其中的WST-8需要在使用时适当分装,以避免反复冻融导致的检测效果下降。

标准品稀释时所用的稀释液应尽量与样品一致。样品用试剂盒提供的SOD样品制备液制备时,标准品也宜使用SOD样品制备液进行稀释;当样品为血液等无需处理的样品时,宜使用试剂盒提供的SOD检测缓冲液稀释标准品。

抗氧化物会对本试剂盒的检测产生干扰,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都会使测定出来的吸光度显著升高。此时尽管样品没有颜色,如果设置了使用说明中的空白对照3,就可以消除样品中的抗氧化物的干扰。

操作步骤:

实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.        加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

2.        弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

3.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

4.        每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.        温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。

7.       依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.       用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后立即进行检测。

IL17A & IL17F     Protein    Human    重组人 IL17A & IL17F Heterodimer 蛋白 (His 标签)

IL23     Protein    Human    重组人 IL23A & 小鼠 IL12B Heterodimer 蛋白 (His 标签)

ITIH3     Protein    Human    重组人 ITIH3 蛋白 (Fc 标签)

GH1     Protein    Human    重组人 GH1 / Growth hormone 1 蛋白

ICAM5     Protein    Human    重组人 ICAM 5 / Intercellular adhesion molecule 5 蛋白 (ECD, His 标签)

GLT8D2     Protein    Human    重组人 GLT8D2 蛋白 (His 标签)

LDLRAD3     Protein    Human    重组人 LDLRAD3 蛋白 (ECD, Fc 标签)

ANTXR2     Protein    Human    重组人 ANTXR2 / CMG2 蛋白 (Fc 标签)

NLGN4X     Protein    Human    重组人 NLGN4X 蛋白 (His 标签)

GYPC     Protein    Human    重组人 GYPC / Glycophorin-C 蛋白 (His 标签)

OBP2B     Protein    Human    重组人 OBP2B / Odorant-binding protein 2b 蛋白 (His 标签)

VMO1     Protein    Human    重组人 VMO1 蛋白 (Fc 标签)

SSR1     Protein    Human    重组人 TRAP-alpha / SSR1 蛋白 (Fc 标签)

STC1     Protein    Human    重组人 STC-1 / Stanniocalcin-1 蛋白 (His 标签)

LY6D     Protein    Human    重组人 LY-6D / LY6D 蛋白 (Fc 标签)

GFER     Protein    Human    重组人 GFER / ALR 蛋白 (His 标签)

GALNT7     Protein    Human    重组人 GALNT7 蛋白 (His 标签)

小鼠气管上皮细胞完全培养基    100mL    磷酸化活化复制因子2抗体

小鼠气管平滑肌细胞完全培养基    100mL    磷酸化失调症蛋白1抗体

小鼠肺成纤维细胞完全培养基    100mL    锚蛋白重复结构域蛋白17抗体

小鼠支气管上皮细胞完全培养基    100mL    胞质乙醛脱氢酶1抗体

小鼠支气管成纤维细胞完全培养基    100mL    ADP核糖基化样因子ARL3抗体

小鼠肺大静脉平滑肌细胞完全培养基    100mL    花生四烯酸15脂氧合酶1抗体

小鼠肺大动脉平滑肌细胞完全培养基    100mL    乳腺癌增强蛋白2抗体

小鼠肺大动脉内皮细胞完全培养基    100mL    α1微球蛋白抗体

小鼠肺动脉成纤维细胞完全培养基    100mL    α晶状体球蛋白B/αB-crystallin抗体

小鼠肺大静脉内皮细胞完全培养基    100mL    腺苷A2b受体/神经生长因子1受体抗体

小鼠气管和支气管上皮细胞完全培养基    100mL    AMPK的相关蛋白激酶5抗体

小鼠胰岛细胞完全培养基    100mL    致瘤磷蛋白32相关蛋白1抗体

小鼠胰腺星状细胞完全培养基    100mL    腺苷脱氨酶抗体

小鼠胰腺导管上皮细胞完全培养基    100mL    含锚蛋白重复序列-细胞因子信号抑制物盒蛋白家族4抗体

小鼠颌下腺上皮细胞完全培养基    100mL    ATRNL1蛋白抗体

小鼠腮腺细胞完全培养基    100mL    AFP4a蛋白抗体

H辅酶ⅠNAD测试剂盒微量法小鼠乳腺上皮细胞完全培养基    100mL    铁蛋白Fe65样蛋白1抗体

小鼠胰腺上皮细胞完全培养基    100mL    铁蛋白Fe65样蛋白2抗体

小鼠甲状腺上皮细胞完全培养基    100mL    β淀粉样蛋白前体蛋白结合蛋白2抗体

小鼠淋巴管内皮细胞完全培养基    100mL    早老素稳定因子样蛋白/γ分泌酶组件蛋白APH1抗体



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