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猫免疫缺陷病毒PCR检测试剂盒说明书

  • 更新时间:  2019-04-30
  • 产品型号:  
  • 简单描述
  • 猫免疫缺陷病毒PCR检测试剂盒说明书是即用型PCR试剂盒的改良产品, 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR 增强剂、上样染料等所有PCR 所需要的成分,用户只需加入模板和引物即可进行PCR 反应,具有广泛的用途。
详细介绍

样品 DNA 的制备:
1.用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼 容。。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒 DNAout。 本试剂盒免费赠送 15 次 DNA 病毒裂解液试用装(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀释阳性对照(以 10E2-10E7 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的长为 86bp 的 DNA 片段作为阳性对照。
2.标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
3.用带芯枪头分别加入 45 μL 模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4.在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡 1 分钟,得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。5.换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6.换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7.换枪头,在 4 号管中加 5 μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照到 4 号管中,得1×10E4 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。8.重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

特点:
高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增;
高灵敏度:检测灵敏度可达10~100;
操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测;
高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。

产品名称

猫免疫缺陷病毒PCR检测试剂盒说明书

英文名称

Feline Immunodeficiency Virus(FIV)RTPCR

分类

PCR检测试剂盒


反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。

使用及效果:
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。

人肿瘤转移抑制基因KISS-1(Metastasis-suppressorKiSS-1)ELISA试剂盒250mg 0.156-10 ng/mL1-(4-氨丁基)胍硫酸盐 AGMATINE SULFATE SALT(P)

VRB-MUG琼脂5g 100gGuanie鸟嘌呤

ELISAKitforHumanPhosphatidylinositol3,4,5-trisphosphate-dependentRacexchanger1protein1g 0.156-10 ng/mLL-(+)-石酸二乙酯 DIETHYL-L-TARTRATE, (+)-(RG)

CarbonicAnhydraseIII/CA3抗體,兔單抗18085-97-7HPLC≥98%A073120mg/支IHC-P   棕矢车菊素

人Saitohin蛋白(STH)ELISA试剂盒1g 0.156-10 ng/mL环己 CYCLOHEXANOL(SG)

大鼠腺上皮细胞 20mg HPLC≥98%Maackiain用于含量测定5 x 10^5 cells/T25培养瓶高丽槐素;马卡因

IL20RA/IL-20RA抗體,兔單抗10mgELISA   IHC-P   香叶木素 DIOSMETIN(SH)

ELISAKitforHumanZinc-alpha-2-glycoprotein93675-88-8 20mgForsythoside E HPLC≥98% 0.156-10 ng/mL连翘酯苷E

N-Cadherin/CD325/CDH2抗體,兔單抗59-92-7UV≥99%A017620mg/支ELISA   FCM   左旋多巴

人二肽基肽酶10(DDP10)ELISA试剂盒3681-93-4  20mg Vitexin  78-5000 pg/mL牡荆素

PLK4抗體,兔多抗,抗原親和純化 111-96-6 1mL 0.999WB   IHC-P   IF  ICC/IF   二乙二二

ELISAKitforHuman3-hydroxyacyl-CoAdehydrogenasetype-2156764-83-95mg Hosenkoside C 0.156-10 ng/mL凤仙萜四苷C

LESMF保存性培养基17-5247-01 100gHISTRAP HP 5 X 1 ML

人甘露糖结合蛋白C(MBP-C)ELISA试剂盒10mg 0.156-10 ng/mL3-乙酰基-β-香酸 ACETYL-B-BOSWELLIC ACID, 3-(P)

液体菌种保存管125-05061 1.4ml*50支Wako 125-05061 Lysyl Endopeptidase

ELISAKitforHumanProrelaxinH24 x 10mg 15.6-1000 pg/mL北五味子标准品试剂盒 SCHISANDRA STANDARDS KIT(P)

猫免疫缺陷病毒PCR检测试剂盒说明书非洲防己碱 C20H20NO4+  Columbamine SMPDL3A抗體,兔多抗,抗原親和純化 ≥98%

番茄苷 10mg  Tomatine 人谷胱甘肽过酶1(GPX1)ELISA试剂盒

盐酸白屈菜红碱;白菜屈红碱氯化物; 白屈菜赤碱氯化物 20mg ChelerythrineChloride 人肝细胞癌结合蛋白TD26ELISA试剂盒 HPLC≥98%

1-丁 1-Butanol >99.0%(GC)  500ML ELISAKitforHumanLeucyl-cystinylaminopeptidase

山竹果标准品试剂盒 MANGOSTEEN STANDARDS KIT(P)  5 x 10mg RPS6抗體,兔多抗,抗原親和純化

NORCIMIFUGIN(P)  5mg ELISAKitforHumanSerine/threonine-proteinkinasePLK1

三盐酸亚精胺 亚精胺(精咪)  1g 维生素K1

雷公藤内酯;雷藤  HPLC≥98% Triptonide 人胰腺星状细胞,HPSCP细胞 用于含量测定

 


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