小隐孢子虫PCR检测试剂盒说明书
样品 DNA 的制备:
1.用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼 容。。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒 DNAout。 本试剂盒免费赠送 15 次 DNA 病毒裂解液试用装(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀释阳性对照(以 10E2-10E7 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的长为 86bp 的 DNA 片段作为阳性对照。
2.标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
3.用带芯枪头分别加入 45 μL 模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4.在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡 1 分钟,得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。5.换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6.换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7.换枪头,在 4 号管中加 5 μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照到 4 号管中,得1×10E4 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。8.重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
特点:
高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增;
高灵敏度:检测灵敏度可达10~100;
操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测;
高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
产品名称 | 小隐孢子虫PCR检测试剂盒说明书 |
英文名称 | Cryptosporidium parvumPCR |
分类 | PCR检测试剂盒 |
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
使用及效果:
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
ELISAKitforHumanDNAreplicationfactorCdt122368-21-4 20mgEupatilin HPLC≥98% 0.156-10 ng/mL异泽兰黄素;泽兰林素
CD3e/CD3epsilon抗體,兔多抗,抗原親和純化15291-77-7HPLC≥98%A016420mg/支ELISA IP 银杏内酯B
人胱天蛋白酶9(Caspase-9/MCH6/ICE-LAP6)ELISA试剂盒32451-88-0 20mg Isochlorogenic acid C 0.78-50 ng/mL异绿原酸C
LDLR/LDLReceptor抗體,兔單抗118-34-3C17H24O9Syringin≥98%ELISA 紫丁香苷
ELISAKitforHumanHLAclassIIhistocompatibilityantigen,DRB1-15betachain108657-10-95mg Eupalinolide K 0.78-50 ng/mL野马追内酯K
胰酪胨大豆多粘菌素肉汤基础5g 250gAdenine 腺嘌呤
人血管紧张素Ⅱ1A型受体(Type-1AangiotensinIIreceptor)ELISA试剂盒480-36-4 20mgBuddleoside HPLC≥98% 7.8-500 pg/mL蒙花苷
胰蛋白胨胆盐琼脂(TBA)(ISO9038-1-2000)190-05535 250gWako 190-05535 Trisodium Citrate
ELISAKitforHumanPutativeRNA-bindingprotein325mg 78-5000 pg/mL斑蝥素 CANTHARIDIN(RG)
3.5%NaC1精氨酸脱羧酶发酵管Technovit3040BRTechnovit3040 印模材料(镶嵌树脂)
人VGF神经生长因子诱导蛋白ELISA试剂盒2 x 25mg 78-5000 pg/mL牛蒡属标准品试剂盒 BURDOCK STANDARDS KIT(P)
小鼠小胶质细胞,MM细胞 20mg HPLC≥98%schisantherin B用于含量测定5 x 10^5 cells/T25培养瓶五味子酯乙
S100A9抗體,鼠單抗520-26-3HPLC≥98%A003220mg/支FCM IF ICC/IF 橙皮苷
大鼠肾小管上皮细胞,RRTEC细胞 20mg HPLC≥98%Polygalasaponin V用于含量测定5 x 10^5 cells/T25培养瓶瓜子金皂苷V
EpCAM/TROP-1/TACSTD1抗體,鼠單抗94596-28-8HPLC≥98%A058120mg/支ELISA 洋川芎内酯I
人红细胞生成素受体(EPOR)ELISA试剂盒52286-58-5 20mg Ginsenoside Rf 78-5000 pg/mL人参皂苷Rf
小隐孢子虫PCR检测试剂盒说明书2'-脱氧肌苷 DEOXYINOSINE, 2'-(RG) 25mg ELISAKitforHumanLysosomal-associatedtransmembraneprotein4B
欧夹竹桃苷乙 ADYNERIN(P) 25mg 人血管内皮细胞生长因子B(VEGF-B)ELISA试剂盒
洋地黄皂苷 DIGITONIN(RG) 1g ICAM-1/CD54抗體,鼠單抗
基-BSA(OVA)抗原 1 马铃薯琼脂培养基
人参皂苷Rh4;参皂甙Rh4 HPLC≥98% Ginsenoside Rh4 小鼠垂体细胞 用于含量测定
洋艾素 20mg Absinthin ELISAKitforHumanFibronectin
β-大马 DAMASCONE, B-(RG) 1g 人磷脂酰肌聚糖合成类蛋白F(PIG-F)ELISA试剂盒
原花青素A1 5mg Procyanidin A1 人肌肽酶1(CNDP1)ELISA试剂盒