同牛疱疹病毒型牛巨细胞病毒PCR检测试剂盒
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
产品名称 | 同牛疱疹病毒型牛巨细胞病毒PCR检测试剂盒供应商 |
英文名称 | Bovine Cytomegalovirus(BCV,3)PCR |
分类 | PCR检测试剂盒 |
特点:
高特异性:与其他病毒无交叉反应,无非特异性扩增;
高灵敏度:检测灵敏度可达10~100;
操作简便:该系列所有试剂均采用相同的体系和条件,可同时进行多个检测;
高通量:多种双重PCR检测以及三重PCR检测试剂盒。
样品 DNA 的制备:
1.用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼 容。。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒 DNAout。 本试剂盒免费赠送 15 次 DNA 病毒裂解液试用装(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀释阳性对照(以 10E2-10E7 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的长为 86bp 的 DNA 片段作为阳性对照。
2.标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
3.用带芯枪头分别加入 45 μL 模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4.在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡 1 分钟,得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。5.换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6.换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7.换枪头,在 4 号管中加 5 μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照到 4 号管中,得1×10E4 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。8.重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
使用及效果:
PCR反应特点
(1) 特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。
(2) 灵敏度高
PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=10-12g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=10-6g)水平。能从100万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达3个RFU(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为3个细菌。
(3) 简便、快速
PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。
(4) 对标本的纯度要求低
不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。
人Klotho蛋白(KL)ELISA试剂盒25G 7.8-500 pg/mL(2-溴乙基)苯 (2-Bromoethyl)benzene >97.0%(GC)
Mueller-Hinton琼脂(MHA)100mg 250gNADP Na2 型辅酶Ⅱ
大鼠表皮干细胞 20mg HPLC≥98%Salvianolic acid B用于含量测定5 x 10^5 cells/T25培养瓶丹酸B;参酸B
马铃薯琼脂/PotatoAgar013-20131霉菌、酵母菌的培养、鉴定水质分析阴离子表面活性剂混合标准溶液
人线粒体天冬氨酸谷氨酸载体同工型1(AGC1/SLC25A12)ELISA试剂盒25mg 0.312-20 ng/mL环黄芪 CYCLOASTRAGENOL(P)
大鼠前列腺上皮细胞 20mg HPLC≥98%Nardosinone用于含量测定5 x 10^5 cells/T25培养瓶甘松新;苷松新
TIM-3/HAVCR2抗體,兔單抗25mgELISA 香叶木素 DIOSMETIN(P)
ELISAKitforHumanAngiomotin-likeprotein1487-41-2 20mgPhillyrin HPLC≥98% 31.2-2000 pg/mL连翘苷;连翘甙
CLEC1B/CLEC2抗體,兔單抗83-49-8UV≥98%A017220mg/支ELISA 猪去氧胆酸
人Ⅰ型胶原(ColⅠ)ELISA试剂盒24939-16-0 20mg Bisdemethoxycurcumin 0.312-20 ng/mL双去氧基姜黄素
EphB6/EphReceptorB6抗體,兔多抗,抗原親和純化6066-49-5C12H14O23-n-Butylphthalide≥98%ELISA IHC-P 正丁基苯酞
ELISAKitforHumanHMGbox-containingprotein136531-08-55mg Guaiacin 0.156-10 ng/mL愈创木素
GFRA2抗體,兔單抗10mgWB 岩白菜宁 BERGENIN(P)
人棕榈酰化膜蛋白6(MPP6)ELISA试剂盒10mg 12.5-800 pg/mL3-乙酰基-α-香酸 ACETYL-a-BOSWELLIC ACID, 3-(P)
营养肉汤/普通肉汤培养基/NB038-24061一般细菌培养四丁基双(三氟甲酰基)亚胺547718-93-4
ELISAKitforHumanRho-relatedGTP-bindingproteinRhoC5mg 0.312-20 ng/mL宝藿苷 I BAOHUOSIDE I(P)
同牛疱疹病毒型牛巨细胞病毒PCR检测试剂盒供应商降红木素/胭脂树橙 BIXIN(P) 10mg 人酪氨酸蛋白激酶Tec(Tyrosine-proteinkinaseTec)ELISA试剂盒
N-乙酰-L-谷氨酰胺/乙酰谷酰胺 ACETYL-L-GLUTAMINE, N-(RG) 5g 人鱼精蛋白1(PRM1)ELISA试剂盒
去氧土大黄苷;脱氧土大黄苷;甲基虎杖苷 20mg Deoxyrhapontin ELISAKitforHumanAlkalinephosphatase,tissue-nonspecificisozyme HPLC≥98%
牛血清白蛋白Ⅴ(不含脂肪酸) 5g 平板计数琼脂(PCA)
植酸(UV98%) 20mg Phytic acid ELISAKitforHumanGlycineN-methyltransferase
9-乙酰菲 ACETYLPHENANTHRENE, 9-(RG) 250mg ELISAKitforHumanNesfatin-1
脱甲氧姜黄 DEMETHOXYCURCUMIN(SH) 1g CD31/PECAM1抗體(FITC),鼠單抗
密力特苷 20mg Melittoside 人白介素3受体α亚基(IL-3receptorsubunitalpha)ELISA试剂盒