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产品介绍：
产品　DC细胞
产品概述

DC细胞，即树突状细胞（Dendritic Cell）是正常人体内存在的一种具有强大的抗原提呈功能的一类特殊的细胞，被喻为机体的“天然佐剂"。2011年10月3日，瑞典卡罗琳医学院在斯德哥尔摩宣布，2011年诺贝尔生理学或医学奖授予加拿大科学家拉尔夫·斯坦曼、生于卢森堡的法国籍科学家朱尔斯·霍夫曼以及美国科学家布鲁斯·博伊特勒，以表彰他们在免疫学领域取得的革命性研究成果。其中，斯坦曼(RalphM·Steinman)教授，因其在免疫系统领域以及树突状细胞(Dendritic cell简称DC)等一系列研究发现，独享奖金的一半，另外一半由其他两位科学家分享。被誉为“DC细胞之父"的斯坦曼教授在2006年就查出胰腺癌晚期。在医学上，晚期胰腺癌的恶化程度高，生存期不会超过6个月。然而，斯坦曼教授正是在接受了以他自己的研究成果“树突细胞"(DC细胞)为依据的细胞后，成功地将生命延长。

DC细胞抗肿瘤机制如下：

a)DC可以高表达MHC-Ⅰ类和MHC-Ⅱ类分子，MHC分子与其捕获加工的肿瘤抗原结合，形成肽-MHC分子复合物，并递呈给T细胞，从而启动MHC-I类限制性CTL反应和MHC-Ⅱ类限制性的CD4+Thl反应。同时，DC还通过其高表达的共刺激分子(CD80/B7-1、CD86/B7-2、CD40等)提供T细胞活化所必须的第二信号，启动了免疫应答。

b)DC与T细胞结合可大量分泌IL-12、IL-18激活T细胞增殖，诱导CTL生成，主导Th1型免疫应答，利于肿瘤清除；激活穿孔素P颗粒酶B和FasL/Fas介导的途径增强NK细胞毒作用；

c)DC分泌趋化因子(Chemotactic Cytokines，CCK)专一趋化初始型T细胞促进T细胞聚集，增强了T细胞的激发。保持效应T细胞在肿瘤部位长期存在，可能通过释放某些抗血管生成物质(如IL-12、IFN-γ)及前血管生成因子而影响肿瘤血管的形成。上述CCK进一步以正反馈旁分泌的方式活化DC，上调IL-12及CD80、CD86的表达；同时DC也直接向CD8+T细胞呈递抗原肽，在活化的CD4+T细胞辅助下使CD8+T细胞活化，CD4+和CD8+T细胞还可以进一步通过分泌细胞因子或直接杀伤，增强机体抗肿瘤免疫应答。

DC刺激免疫反应有以下特点：

1.树突状细胞（DC)是人体内功能强的专职抗原递呈细胞，DC相当于信使，将抗原信息传递给T细胞，并具有活化T细胞的功能，很少量就可以激发强大的T细胞反应。

2.可致敏辅助T细胞的多种细胞因子，显著刺激初始型T细胞增殖，以激活体内静止状态的初始型T细胞（而巨噬细胞、B细胞仅能刺激已活化的或记忆性T细胞）。

3.帮助重建肿瘤患者对肿瘤细胞的免疫监视功能。机体的免疫系统具有完备的监视功能，但肿瘤细胞对机体的免疫系统有抵抗和抑制作用，使得免疫细胞不能识别和杀伤肿瘤细胞。在DC疫苗培养中用肿瘤抗原诱导DC使其致敏后，可将其抗原信息传递给T细胞，使T细胞重新识别和杀伤肿瘤细胞。
冷冻保存细胞之方法：

细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

沙保罗葡萄糖琼脂表面培养基60mm/25cm2   近平滑假丝酵母

双歧双歧杆菌   束状刺盘孢

匣状粘球菌   发酵纤维单胞菌

路德类酵母   硫乙醇酸盐平板培养基90mm

哈茨木霉   粪产碱菌
活化T细胞核因子1蛋白抗体     巴尔得-别德尔综合征相关蛋白4抗体

神经细胞发育相关调控蛋白抗体     巴尔得-别德尔综合征相关蛋白2抗体

0酸化p-IκB-α抗体     巴尔得-别德尔综合征相关蛋白12抗体

0酸化细胞核因子NF-κB p65抗体     巴尔得-别德尔综合征相关蛋白10抗体

核因子κB抑制蛋白α抗体     巴德-毕德氏综合征蛋白BBS6抗体
DC细胞说明鸡HSP60抗体(IgG)elisa分析检测试剂盒

鸡HSP27抗体(IgG)ELISA ki

鸡HSP27 IgM 抗体elisa分析检测试剂盒

鸡H5型病毒(H5N1)抗体(IgG)elisa分析检测试剂盒

鸡G0/G1期开关基因(G0S2)elisa分析检测试剂盒

培养操作：产品仅用于科研
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。