产品介绍：
产品　CIK细胞
产品概述

CIK细胞，即细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine-Induced Killer，CIK)是一种新型的免疫活性细胞，CIK增殖能力强，细胞毒作用强，具有一定的免疫特性。

由于该细胞同时表达CD3+和CD56+两种膜蛋白分子，故又称为NK细胞（自然杀伤细胞）样T淋巴细胞，兼具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性，和NK细胞的非MHC限制性杀瘤优点。该细胞对肿瘤细胞的识别能力很强，，能精确“点射"肿瘤细胞，但不会伤及“无辜"的正常细胞。尤其对手术后或放后患者，能消除残留微小的转移病灶，防止癌细胞扩散和复发，提高机体免疫力，

CIK细胞可以通过多机制抗肿瘤、抗病毒：

1.CIK细胞能以不同的机制识别肿瘤细胞，通过直接的细胞质颗粒穿透封闭的肿瘤细胞膜进行胞吐，释放穿孔素、颗粒酶，实现对肿瘤细胞的裂解；

2.CIK细胞能分泌IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-6等多种炎性细胞因子，对肿瘤也有直接抑制作用；

3.CIK细胞可以通过配体-受体（Fas:FasL）介导的方式诱导肿瘤细胞凋亡，因此CIK尤其适用于FasL阳性肿瘤的治疗；

4.CIK细胞分泌的细胞因子能显著刺激初始型T细胞增殖，有效激活机体的免疫系统，使之趋于正常，提高病人自身抗肿瘤的能力。

目前，肿瘤的发生机制尚未形成普遍接受的理论。研究者普遍认可肿瘤的发生、发展与人体的免疫功能密切相关。即在正常情况下，肿瘤与机体的防御机能之间处于一种动态的平衡，而一旦这种平衡被破坏，就可能发生肿瘤。身体各组织细胞受到外界化学、物理、生物等因素刺激或自身细胞衰老变异等因素的影响，使得体内某些细胞发生突变，成为癌前细胞；而机体免疫功能低下或者由于免疫异常，无法及时识别、杀伤、清除这些异常细胞，突变细胞在组织内复制生长，达到一定数量后破坏器官功能，肿瘤即发生。肿瘤患者，尤其是恶性肿瘤病人往往免疫功能、特别是细胞免疫功能低下，因而疾病呈进展、活动、预后差。因此，提高机体免疫力，建立有效的免疫应答是治疗肿瘤有希望的途径。CIK细胞治疗即将大量杀伤性高、功能强、数量多的免疫活性细胞回输患者体内，直接发挥杀死肿瘤细胞的作用，并通过调节、激活患者的免疫体系，调动、提高患者自身的抗肿瘤能力。

CIK细胞具有以下突出的特点：

1.增殖速度快，杀瘤活性高。CIK细胞可以在体外大量扩增，培养14天可以增殖200倍以上，其效应细胞CD3+CD56+的增殖可达1000倍以上，抗肿瘤活性得以大大增强。

2.杀瘤谱广。CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤是非MHC限制的，对多种肿瘤细胞均有杀灭作用。

3.能抵抗肿瘤细胞引发的效应细胞Fas-FasL凋亡。CIK细胞虽然在Fas被占据后会引起少量细胞凋亡，但对其杀瘤细胞毒性没有明显影响；反之，CIK细胞可以诱导FasL阳性肿瘤细胞的凋亡。

4.对多重耐药肿瘤细胞同样敏感。CIK细胞对放、敏感的亲本细胞和不敏感的转化细胞均具有强大的杀伤活性。

5.CIK细胞杀瘤活性不受CsA（A）和FK506（普乐可复）等免疫抑制剂的影响。

6.对正常骨髓造血前体细胞毒性小，仅对红系生成产生轻微的抑制，这可能与CIK细胞自身分泌高水平的IFN-γ有关。

7.CIK细胞具有识别肿瘤的机制，特异性强，对正常的细胞无毒性作用。

8.安全性好。CIK细胞是活化的患者自体细胞，应用安全，不会产生排斥等反应，患者副反应小。
产品属性：

细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

培养操作：产品仅用于科研
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

冷冻保存细胞之方法：

沙保罗琼脂平板70mm   泡盛曲霉  酱油糖化曲。

植物乳杆菌   亮白曲霉  酿造小曲酒、甜酒。

抗生链霉菌   化脓性链球菌

果香地霉   近平滑假丝酵母

菊糖芽孢乳杆菌   真线侧耳短孢变种
核抑制蛋白0酸酶1抗体     巴德-毕德氏综合征蛋白BBS5抗体

0酸化细胞核受体Rev-Erbα抗体     八聚体结合转录因子6抗体

离子/牛磺胆酸共转运蛋白抗体     氨肽酶A抗体

α-中连蛋白抗体     氨基乙二酸半醛脱氢酶0酸泛酰巯基乙胺转移酶抗体

鸡新城疫抗体     氨基酰化酶1抗体
CIK细胞培养鸡HSP60抗体(IgM)elisa检测试剂盒免费代测

鸡HSP60抗体(IgG)elisa检测试剂盒

鸡HSP27抗体(IgG)ELISA ki

鸡HSP27 IgM 抗体elisa检测试剂盒

鸡H5型病毒(H5N1)抗体(IgG)elisa检测试剂盒免费代测