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HELA 人子宫颈癌细胞

  • 更新时间:  2023-11-07
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  • 简单描述
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详细介绍

HELA 人子宫颈癌细胞

名称

Hela (人宫颈癌细胞) (STR鉴定正确)

别称

HELA; Hela; He La; He-La; Henrietta Lacks cells; Helacyton gartleri

种属

生长特性

贴壁细胞

细胞形态

上皮细胞样

生长培养基

MEM(含NEAA)+10% FBS+1% P/S

冻存条件

冻存液:55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO温度:液氮

培养条件

气相:空气,95%;CO2,5%温度:37℃

推荐传代比例

1:2-1:4

推荐换液频率

2~3次/周

背景描述

Hela细胞是第一个来自人组织和连续培养维持非整倍体上皮样细胞系。Hela细胞是由G·D·Gey等在1951年从31岁女性黑人的宫颈癌建立。经原始组织切片样品的重新观察,Jones等将其诊断为腺癌。已知该细胞系含有人乳头状瘤病毒18序列,需在2级生物安全防护台操作。Hela细胞角蛋白阳性,p53表达量较低,但表达正常水平的Prb(视网膜母细胞瘤抑制因子)。

年龄(性别)

女;31岁

组织来源

宫颈腺癌

细胞类型

肿瘤细胞

肿瘤类型

宫颈癌细胞

生物安全等级

2

倍增时间

~32-48 hours

基因表达情况

Lysophosphatidylcholine (lyso-PC) induces AP-1 activity and c-jun N-terminal kinase activity (JNK1) by a protein kinase C-independent pathway. The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining.

保藏机构

ATCC; CCL-2 ATCC; CRM-CCL-2 ATCC; CRL-7923BCRC; 60005 BCRJ; 0100 DSMZ; ACC-57 ECACC; 08011102 ECACC; 93021013

二、细胞培养操作

1) 复苏细胞:以下细胞培养冻存处理仅供参考,具体操作步骤以随货产品说明书为主。将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min,弃去上清液,加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10 cm皿中,加入约8 mL培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。

 a、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。        

 b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,使消化液浸润所有细胞,将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2 min(视细胞情况而定),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2-3ml培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中,1000 rpm离心5 min,弃去上清液,补加1-2 mL培养液后吹匀。        

 c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,置于培养箱中培养。
3) 细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例;
a、收集细胞及细胞培养液,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。

 b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液,注意冻存管做好标识。将冻存管放入-80℃冰箱,24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。  

三、培养注意事项

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象 发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等,确保细胞培养条件一致,若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由 客户自行承担。

3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题,部分细胞由于温度 变化及剧烈碰亡破碎形成碎片,是正常现象。观察好细胞状态后,75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。

4. 贴壁细胞可以消化,悬浮细胞直接混匀收集细胞,900 rpm-1000 rpm 离心 3 min,弃上 清。加 5 mL PBS 重悬细胞,再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min,用新鲜的培养基重悬 细胞,并接种到新的培养瓶或培养皿中,置于培养箱中进行培养。

5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和我司技术部沟通 交流。由于运输的原因,个别敏感细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞 的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

7. 该细胞仅供科研使用。

8. 备注:运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的培养基来培养细胞。     收到细胞后第一次传代建议 1:2 传代。

9. 注意:  1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。


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