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注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义

类黄酮是一类多苯化合物，属于植物次生代谢物，对人体具有消炎，抗菌，降血脂，清除体内羟自由基，预防癌症等作用。

测定原理

在碱性亚硝酸盐溶液中，类黄酮与铝离子形成在510nm处有特征吸收峰的红色络合物，测定样品提取液在510nm处的吸光值，即可计算样品类黄酮含量。

自备实验用品及仪器

天平、烘箱、粉碎仪、筛子、超声破碎仪、60%乙醇、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液：60%乙醇，自备。

试剂一：液体1mL×1管，4℃保存。

试剂二：液体1mL×1管，4℃保存。

试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。

类黄酮提取

将样本烘干至恒重，粉碎，过40目筛之后，称取约0.02g，加入2mL提取液，60℃振荡提取2h，10000g，25℃，离心10min，取上清待测。

测定操作表

1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长至510nm，蒸馏水调零。

2. 操作表

类黄酮含量计算公式

1. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线：y = 5.02x+0.0007，R2 = 0.9996  

类黄酮含量（mg/g 干重）=（ΔA -0.0007）÷5.02÷(W÷V样总)= 0.398×（ΔA -0.0007）÷W

V样总：加入提取液体积，2.5mL； V样：反应中样品体积，0.108mL； W：样品质量，g

b.用96孔板测定的计算公式如下

标准曲线：y = 2.51x+0.0007，R2 = 0.9996

类黄酮含量（mg/g 干重）=（ΔA -0.0007）÷2.51÷(W÷V样总)= 0.797×（ΔA -0.0007）÷W

V样总：加入提取液体积，2mL；V样：反应中样品体积，0.108mL；W：样品质量，g

检出限为10µg/g。

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