土壤α葡萄糖苷酶(Sα GC)测试盒
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货号 | 产品名称 | 规格 |
AS6321287 | 土壤α葡萄糖苷酶(Sα GC)测试盒 | 100管/48样 |
AS6321287 | 土壤α葡萄糖苷酶(Sα GC)测试盒 | 50管/24样 |
测定意义:
S-α-GC能够催化水解芳基或烃基与糖基原子团之间的糖苷键生成葡萄糖,是纤维素分解酶系中重要组成成分之一,在土壤微生物的糖类代谢方面具有重要生理功能。
测定原理:
S-α-GC能够催化对-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯,后者在400nm有特征光吸收。
自备用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:甲苯5mL×1瓶,4℃保存;(自备)
试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前加入10mL蒸馏水,充分溶解备用,用不完的试剂仍-20℃保存;
试剂三:液体20mL×1瓶,4℃保存;
试剂四:液体15mL×1瓶,4℃保存;
样品处理:
新鲜土样自然风干或37度烘箱风干,过30~50目筛。
测定步骤:
分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至400nm,蒸馏水调零。
加样表
试剂名称 | 测定管 | 对照管 |
风干土样(g) | 0.02 | 0.02 |
试剂一(μL) | 10 | 10 |
室温振荡混匀15min | 90℃振荡混匀15min | |
试剂二(μL) | 130 | |
蒸馏水 | 130 | |
试剂三(μL) | 160 | 160 |
混匀, 37℃振荡反应1h后,90℃水浴5min(盖紧,防止水分散失),流水冷却,
10000g 25℃离心10min,取上清液(在EP管或96孔板中加入下列试剂)
上清液(μL) | 70 | 70 |
试剂四(μL) | 130 | 130 |
充分混匀,室温静置2min后, 400nm处测定吸光值A,计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。
S-α-GC活力计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0032x -0.0027;x为标准品浓度(μmol/L),y为吸光值。
单位的定义:每天每g土样中产生1 μmol对-硝基苯定义为一个酶活力单位。
S-α-GC活力(μmol/d/g 土样)= (ΔA+0.0027) ÷0.0032×V反总÷W÷T =112.5×(ΔA+0.0027)
T:反应时间,1h=1/24d; V反总:反应体系总体积:3×10-4 L;W:样本质量,0.02g。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0016x -0.0027;x为标准品浓度(μmol/L),y为吸光值。
单位的定义:每天每g土样中产生1 μmol对-硝基苯定义为一个酶活力单位。
S-α-GC活力(μmol/d /g 土样)= (ΔA+0.0027) ÷0.0016×V反总÷W÷T =225×(ΔA+0.0027)
T:反应时间,1h=1/24d; V反总:反应体系总体积:3×10-4 L;W:样本质量,0.02g。
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