D283 Med人脑髓母细胞瘤细胞
D283 Med人脑髓母细胞瘤细胞
名称 | D283 Med (人脑髓母细胞瘤细胞) (STR鉴定正确) |
别称 | D283 MED; D283-MED; D-283 Med; D-283MED; D283MED; D283Med; D283-Med; D283; Med 283; H283 |
种属 | 人 |
生长特性 | 半贴半悬 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长培养基 | MEM（含NEAA）＋10% FBS＋1% P/Sv |
冻存条件 | 冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO温度：液氮 |
培养条件 | 气相：空气，95%；CO₂，5%温度：37℃ |
推荐传代比例 | 1:2-1:4 |
推荐换液频率 | 2~3次/周 |
参考资料(来源文献)
背景描述 | D283 Med细胞是由Friedman等人于1985年建系，源自一名6岁患有神经管细胞瘤有腹腔转移的白人男性小孩的腹水细胞。 |
年龄（性别） | 男；6岁 |
组织来源 | 脑组织 |
细胞类型 | 肿瘤细胞 |
肿瘤类型 | 成髓瘤细胞 |
生物安全等级 | 1 |
倍增时间 | ~52 hours |
致瘤性 | Yes, in nude mice(The cells form serially transplantable intercranial and subcutaneous tumors.)Yes, in soft agar |
基因表达情况 | The cells produce tumors in nude mice and the resulting tumors are glutamine synthetase positive; neuron specific enolase positive; glial fibrillary acidic proteins negative; S100 (S-100) protein negative; The cells express elevated levels of four biochemical markers of SCLC (neuron specific enolase; the brain isoenzyme of creatine kinase; L-DOPA decarboxylase; bombesin-like immunoreactivity) |
保藏机构 | ATCC; HTB-185IZSLER; BS TCL 203KCB; KCB 2010201YJ |
二、细胞培养操作
1) 复苏细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2 min（视细胞情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3) 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
三、培养注意事项
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象 发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由 客户自行承担。
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度 变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。
4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，弃上 清。加 5 mL PBS 重悬细胞，再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，用新鲜的培养基重悬 细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通 交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞 的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
7. 该细胞仅供科研使用。
8. 备注：运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议 1：2 传代。
9. 注意： 1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。
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