PAT基因检测试剂盒(恒温荧光法)
服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
【检测原理】
PAT基因检测试剂盒(恒温荧光法)本试剂盒根据荧光 PCR 技术原理,针对 PCR试剂盒设计特异性引物和 Taqman 探针,通过荧光 PCR 检测仪进行检测,从而实现对 PCR试剂盒的检测。
【储存条件及有效期】
1.避光-20℃储存,有效期 12 个月。
2.低温运输不能超过 4 天;开封后避光-20℃储存,对有效期没有影响。避免反复冻融,冻融 6 次不影响检测效果。
3.生产日期、有效期至:见外包装盒。
【适用仪器】
适用于 ABI 7500、Bio-Rad CFX96、Roche480 等全自动荧光PCR 检测仪。
【样本要求】
1.样本种类:鼻/、痰液、支气管肺泡灌洗液;培养物等样品。
2.保存条件:采集的标本应及时送检,24 小时内检测的应 4℃保存,超过 24 小时的最好-70℃保存,并避免反复冻融。
3.步骤:②中 55℃时荧光检测,检测通道为 FAM。*ABI 系列荧光 PCR 仪不选 ROX 校正,淬灭基团选 None。
4 . 结果分析根据分析后图像调节起止值,(建议起始设在 3~15、终止设在 5~20,同时调整阴性对照的扩增曲线平直或低于阈值线),点击分析,在报告界面查看结果。
【质量控制】
1.阴性对照:Ct 值>38 或未检出。
2.阳性对照:扩增曲线呈 S 型,且 Ct 值≤30。
3.同一实验以上要求需同时满足,否则本次实验视为无效。
4.每种检测靶标都需设阴阳对照,不同的靶标根据对应阴性调整基线阈值。
【结果判读】
1.FAM 通道检测。
2.阴性:Ct 值>38 或未检出。
3.阳性:扩增曲线呈 S 型,且 Ct 值≤35。
4.可疑:扩增曲线呈 S 型,且 35<Ct 值≤38,需复检;复检结果若一致,判定结果为阳性。
【检验方法的局限性】
1.样品采集、运输、保存不当,试剂运输、保存、配置不当都可能会影响实验结果,甚至会导致假阴性结果。
2.如果实验室污染、试剂污染、样品交叉污染,可能出现假阳性结果。
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