【适用仪器】

适用于 ABI 7500、Bio-Rad CFX96、Roche480 等全自动荧光PCR 检测仪。

【检测原理】

pFMV35S基因检测试剂盒（PCR-荧光探针法）本试剂盒根据荧光 PCR 技术原理，针对 PCR试剂盒设计特异性引物和 Taqman 探针，通过荧光 PCR 检测仪进行检测，从而实现对 PCR试剂盒的检测。

服务流程：
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
【储存条件及有效期】

1．避光-20℃储存，有效期 12 个月。
2．低温运输不能超过 4 天；开封后避光-20℃储存，对有效期没有影响。避免反复冻融，冻融 6 次不影响检测效果。

3．生产日期、有效期至：见外包装盒。

【样本要求】

1．样本种类：鼻/、痰液、支气管肺泡灌洗液；培养物等样品。
2．保存条件：采集的标本应及时送检，24 小时内检测的应 4℃保存，超过 24 小时的最好-70℃保存，并避免反复冻融。
3.步骤:②中 55℃时荧光检测，检测通道为 FAM。*ABI 系列荧光 PCR 仪不选 ROX 校正，淬灭基团选 None。
4 ． 结果分析根据分析后图像调节起止值，（建议起始设在 3～15、终止设在 5～20，同时调整阴性对照的扩增曲线平直或低于阈值线），点击分析，在报告界面查看结果。

【结果判读】

1．FAM 通道检测。

2．阴性：Ct 值＞38 或未检出。

3．阳性：扩增曲线呈 S 型，且 Ct 值≤35。

4．可疑：扩增曲线呈 S 型，且 35＜Ct 值≤38，需复检；复检结果若一致，判定结果为阳性。
【检验方法的局限性】
1．样品采集、运输、保存不当，试剂运输、保存、配置不当都可能会影响实验结果，甚至会导致假阴性结果。

2．如果实验室污染、试剂污染、样品交叉污染，可能出现假阳性结果。
【质量控制】

1．阴性对照：Ct 值＞38 或未检出。

2．阳性对照：扩增曲线呈 S 型，且 Ct 值≤30。

3．同一实验以上要求需同时满足，否则本次实验视为无效。

4．每种检测靶标都需设阴阳对照，不同的靶标根据对应阴性调整基线阈值。

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