病毒沉淀剂
中文名称：病毒沉淀剂
英文名称：Virus Precipitation Reagent
产品规格：100mL
产品货号：FS-01F9510
生物医学实验中，常常需要从液体样品(如血浆，培养基)中纯化病毒，但由于病毒颗粒十分细小，传统的分离方法是使用长时间超速离心才能将其从液体样品中分离出来，此操作非常繁琐，并且病毒在此过程中容易变性。为了克服传统方法的缺点，本公司开发了本产品。
产品特点 能浓缩病毒100倍以上，适合各种病毒。 比超速离心法、密度梯度离心分离法和过滤法更温和，回收率更高，并且大部分病毒能保持活性，适合各种后续实验，包括转染实验和核酸纯化。 比超速离心法和密度梯度离心分离法简单，不需要大型离心机等设备。 适合水样、细胞培养基上清和其他不含细胞的样品。本产品100mL可以处理400mL含病毒的溶液，可以将病毒浓缩100倍以上。 已经成功用于coronaviruses、rhabdoviruses、parainfluenzaviruses、respiratory syncytial virus、rubella virus、picornaviruses等病毒。 对环境水样，请不要使用本产品，而是使用水体病毒沉淀剂。 储存条件：常温运输和保存，有效期一年。 自备试剂 PBS缓冲液或TES缓冲液(用于重悬病毒) 使用方法 注意：需要尽量减少含病毒溶液中蛋白的浓度。收集培养细胞分泌的病毒前，最好换上不含血清蛋白和其他蛋白成分的培养基。 将培养细胞刮下，和培养基一起全部转移到干净的离心管中，10000rpm 4℃离心20分钟。转移上清(含病毒)到新离心管中。如果培养细胞内还毒颗粒，并且病毒颗粒可以抵抗冻融，则可以把细胞冻融数次，释放出包浆的病毒，然后再转移到干净的离心管中，10000rpm 4℃离心20分钟。转移上清(含病毒)到新离心管中。如果病毒溶液不含细胞成分，则直接进入下一步。 在含病毒的上清中加入1/4总体积的本产品(4mL病毒溶液则加1mL本产品)，4℃冰箱中放置过夜或12小时以上。病毒在此期间将形成沉淀。 10000rpm 4℃离心20分钟收集病毒沉淀，尽可能弃掉所有上清(可以暂时保留上清，等确认病毒浓缩成功后再丢弃)。 将离心管放回离心机短暂离心数秒，再次小心去除残留上清。 将沉淀(病毒颗粒)溶于适量预冷的自备的缓冲液(如PBS缓冲液、TES缓冲液和培养基中，取决于后续实验)，立即使用或者-20℃长期保存。 |
注意事项：
①加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
②使用干净的塑料容器配置洗涤液。
③按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
④底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
⑤洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
⑥使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
⑦实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
⑧试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
⑨不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
α-氨基丙酸 L-Alanine BR，99% 25克
D-2-氨基丙酸 D-Alanine BR，99% 5克
DL-α DL-Alanine BR，98.5% 100克
3-氨基丙酸 β-Alanine BR，98% 10克
N-叔丁氧羰基-L- BOC-L-Alanine BR，99% 25克
N-叔丁氧羰基-D- BOC-D-Alanine BR，99% 5克
L-合乙酯盐酸盐 L-Alanine ethlester hydrochloride BR，98.5% 5克
D-氨基丙醇/(R)-(-)-2-胺基-1-丙醇 D-Alaninol BR，98% 1克
2-氨基-5-胍基戊酸 L-Arginine BR，98% 25克
D-2-氨基-5-胍基戊酸 D-Arginine BR，99% 1克
DL-蛋白氨基酸 DL-Arginine BR，98% 5克
L-盐酸蛋白氨基酸 L-Arginine HCL BR，99% 25克
L-精氨基丁二酸钡盐 L-琥珀酸钡盐 98% 1克
L-硝 L-NNA BR，98% 5克
N'-硝基-L甲酯盐酸盐 L-NAME BR，98% 1克
白介素1受体拮抗剂(IL1RA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interleukin 1 Receptor Antagonist (IL1RA) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
趋化素(CHEM)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Chemerin (CHEM) 48T/96T Homo sapiens (Human)
Ⅰ型前胶原(PCⅠ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Procollagen I (PCI) 48T/96T Rattus norvegicus (Rat)
ATP结合盒转运蛋白G2(ABCG2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for ATP Binding Cassette Transporter G2 (ABCG2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
血管紧张素Ⅱ受体2(AGTR2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Angiotensin II Receptor 2 (AGTR2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
神经介素N(NMN)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Neuromedin N (NMN) 48T/96T Homo sapiens (Human)
白介素2(IL2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interleukin 2 (IL2) 48T/96T Canis familiaris; Canine (Dog)
白介素4(IL4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Interleukin 4 (IL4) 48T/96T Canis familiaris; Canine (Dog)
抗麦胶蛋白(AGA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Anti-Gliadin Antibody (AGA) 48T/96T Homo sapiens (Human)
蛋白激酶Cθ(PKCθ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Protein Kinase C Theta (PKCq) 48T/96T Homo sapiens (Human)
蛋白激酶Cι(PKCι)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Protein Kinase C Iota (PKCi) 48T/96T Homo sapiens (Human)
白三烯A4(LTA4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Leukotriene A4 (LTA4) 48T/96T General
蛋白激酶N1(PKN1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Protein Kinase N1 (PKN1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
抗生长激素抗体(Anti-GHAb)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Anti-Growth Hormone Antibody (Anti-GHAb) 48T/96T Homo sapiens (Human)
抗网硬蛋白抗体(ARA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Anti-Reticulin Antibody (ARA) 48T/96T Homo sapiens (Human)
蛋白激酶D2(PKD2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Protein Kinase D2 (PKD2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
抗胰岛素受体抗体(AIRA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Anti-Insulin Receptor Antibody (AIRA) 48T/96T Homo sapiens (Human)
纤维介素蛋白(FGL2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Fibrinogen Like Protein 2 (FGL2) 48T/96T Homo sapiens (Human)
载脂蛋白A1(APOA1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Apolipoprotein A1 (APOA1) 48T/96T Homo sapiens (Human)
蛋白激酶R(PKR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Protein Kinase R (PKR) 48T/96T Homo sapiens (Human)
抗中性粒细胞颗粒抗体(ANEA)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Anti-Neutrophil Elastase Antibody (ANEA) 48T/96T Homo sapiens (Human)
亮氨酰氨基肽酶(LAP)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Leucine Aminopeptidase (LAP) 48T/96T Homo sapiens (Human)
前列腺素D2合成酶(PGD2S)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Prostaglandin D2 Synthase, Brain (PGD2S) 48T/96T Homo sapiens (Human)
葡萄糖6磷酸异构酶(GPI)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Glucose 6 Phosphate Isomerase (GPI) 48T/96T Homo sapiens (Human)
病毒沉淀剂转甲状腺素蛋白(TTR)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ELISA Kit for Transthyretin (TTR) 48T/96T Homo sapiens (Human)
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加化鼠抗*：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
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