293T HEK-293T(胚肾细胞)规格
产品属性:
产品名称 | 规格 | 分类 | 货号 |
293T [HEK-293T](胚肾细胞)规格 | 1×10⁶cells/T25培养瓶 | 细胞系 | FS-01X6325 |
产品介绍:
名称 293T [HEK-293T](胚肾细胞) (STR鉴定正确) 种属 人类 年龄(性别) 胎儿 组织来源 胚胎肾 生长特性 贴壁细胞 细胞形态 上皮细胞样 背景描述 293T细胞是293 [HEK-293]细胞株插入了SV40 T-antigen的温度敏感基因形成的高转衍生株。 生物安全等级 1 生长培养基 DMEM+10% FBS+1% P/S 推荐传代比例 1:3-1:4 推荐换液频率 2~3次/周 倍增时间 ~24-30小时 冻存条件 冻存液:55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO 温度:液氮 培养条件 气相:空气,95%;CO2,5% 温度:37℃ 注意事项 该细胞贴壁松散,操作时请尽量轻柔;换液时需预热培养基;收货如有大块脱落的细胞团,为正常现象,请按照收货注意事项处理。 保藏机构 ATCC; CRL-3216 DSMZ; ACC-635 |
冷冻保存细胞之方法:
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。 | 冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。 |
培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
(敏感菌株)ATCC25923冻干粉 产氨短杆菌
头状秃马勃 单增李斯特菌
巧克力微杆菌 刺孢吸水链霉菌昆明变种
紫色小单孢菌(绛红小单孢菌) 李克犁头霉(伞枝梨头霉)
解淀粉芽孢杆菌 短乳杆菌
葡萄糖转运蛋白1抗体 卡因和调节转录蛋白抗体
受体δ2/GluR-δ2抗体 卡尔曼综合症基因1抗体
自主生长因子1B抗体 卡波西氏肉瘤疱疹潜伏核抗原相互作用蛋白1抗体
GLCNE蛋白抗体 卷曲螺旋域蛋白质85C抗体
半乳糖凝集素9抗体 卷曲螺旋结构域蛋白CHCHD8抗体
293T [HEK-293T](胚肾细胞)规格大鼠可溶性E选择素(sE-selectin)elisa检测试剂盒免费代测
大鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)elisa检测试剂盒
大鼠可溶性CD80(sCD80)elisa检测试剂盒
大鼠可溶性CD40配体(sCD40L)elisa检测试剂盒
大鼠可溶性CD30配体(sCD30L)elisa检测试剂盒免费代测
细胞培养操作规程:产品仅用于科研
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。