DLD-1人结直肠腺癌细胞
DLD-1人结直肠腺癌细胞
名称 | DLD-1 (人结直肠腺癌上皮细胞) (STR鉴定正确) |
别称 | DLD 1; DLD1; CoCL3 |
种属 | 人 |
生长特性 | 贴壁细胞 |
细胞形态 | 上皮细胞样 |
生长培养基 | RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S |
冻存条件 | 冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO温度：液氮 |
培养条件 | 气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃ |
推荐传代比例 | 1:3-1:4 |
推荐换液频率 | 2~3次/周 |
背景描述 | DLD-1细胞是由D·L·Dexter和其同事于1977-1979年分离的两株结直肠腺癌细胞株中的一株。在ATCC和其它地方进行的DNA指纹鉴定和染色体组型分析表明DLD-1细胞与HCT-15细胞相似，说明这两者是来自同一个人的不同克隆。DLD-1细胞和HCT-15细胞的遗传起源可通过DNA指纹鉴定证实，但染色体组型分析显示它们缺乏染色体标记一致改变或数目上一致改变。DLD-1细胞的CSAp阴性(CSAp-)，p53抗原表达呈阳性(p53抗原产生了一个C→T点突变导致241位的Ser→Phe)。DLD-1细胞角蛋白免疫过氧化物酶染色阳性，癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis和fos的表达呈阳性，癌基因N-myc的表达未做检测。DLD-1细胞表达肿瘤特异性核基质蛋白CC-2、CC-3、CC-4、CC-5和CC-6。1979年提交到ATCC的DLD-1细胞代数不明且污染了支原体，其后经过12周多种抗生素联合培养处理，处理之后每周用Hoechst染色和标准培养法检测。其后连续11个月不加抗生素培养，DLD-1细胞所有的检测呈阴性。 |
年龄（性别） | 成年 |
组织来源 | 结直肠腺癌上皮细胞 |
细胞类型 | 肿瘤细胞 |
肿瘤类型 | 肠癌细胞 |
生物安全等级 | 1 |
倍增时间 | ~24-48 hours |
致瘤性 | Yes, in nude mice (Tumors developed within 21 days at 100% frequency (5/5) in nude mice inoculated subcutaneously with 1×10^7 cells). |
抗原表达情况 | Blood Type O.The cells are weakly positive for keratins and vimentin.The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining.DLD-1 cells are positive for p53 antigen expression (the p53 antigen produced has a C -> T mut |
基因表达情况 | carcinoembryonic antigen (CEA) 0.5 ng/10^6 cells/10 days; colon antigen 3. |
保藏机构 | ATCC; CCL-221 BCRC; 60132 DSMZ; ACC-278 ECACC; 90102540 |
二、细胞培养操作
1) 复苏细胞：以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主。将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10 cm皿中，加入约8 mL培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
a、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-2 min（视细胞情况而定），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心5 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。
c、将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。 3) 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例；a、收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。
b、根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
三、培养注意事项
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象 发生请及时和我们联系。
2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需 细胞因子等，确保细胞培养条件一致，若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题，责任由 客户自行承担。
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分细胞由于温度 变化及剧烈碰亡破碎形成碎片，是正常现象。观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将 T25 瓶置于 37℃培养箱放置 2-4h。
4. 贴壁细胞可以消化，悬浮细胞直接混匀收集细胞，900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，弃上 清。加 5 mL PBS 重悬细胞，再 900 rpm-1000 rpm 离心 3 min，用新鲜的培养基重悬 细胞，并接种到新的培养瓶或培养皿中，置于培养箱中进行培养。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。
6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术部沟通 交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，告知细胞 的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。
7. 该细胞仅供科研使用。
8. 备注：运输用的培养基 (灌液培养基) 不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培 养条件新配制的培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议 1：2 传代。
9. 注意： 1:2 传代就是 1 个 T25 瓶传 2 个 T25 瓶或者 2 个 6cm 皿。不是 1 个 T25 瓶传 2 个10cm 皿。
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